测定蛋白质的光度新要领研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 第 1 章综述了分光光度法 荧光光度法 共振散射光度法在蛋白质定量分析 中的研究现状 第2 章采用分光光度计考察了不同酸度条件下酸性棕SR ASR 的吸收光谱 行为 以及与牛血清白蛋白(BSA)在酸性条件下的结合反应 探讨了结合反应的机 理 考察了表面活性剂对结合反应的影响 第 3 章建立了酸性棕 SR ASR 测定血清白蛋白的分光光度新方法 在 Britton-Robinson 酸性缓冲溶液中 加入非离子表面活性剂阿拉伯胶 使酸性棕SR ASR 与血清白蛋白形成复合物 最大吸收波长为610nm 比单纯的ASR 水溶 液红移了165nm = 6.23 4 = 7.23 4 当 =610nm 时 BSA 10 L/molcm HSA 10 L/molcm 牛血清白蛋白 BSA 在 0 91.00mg/L 人血清白蛋白 HSA 在 0 95.20mg/L 范围内服从比尔定律 检出限分别为BSA 5.72mg/L HSA 5.15mg/L 对6 个人血清蛋白总量平行6 次测定 相对标准偏差1.84% 4.41% 回收率93.47% 109.18 % 并对5 只小白鼠的血清蛋白总量进行了测定 第4 章研究了酸性棕SR ASR 蛋白质的共振散射光谱 考察了体系的光 谱特征和主要影响因素 建立了人血清白蛋白(HSA) 牛血清白蛋白(BSA) 卵清 白蛋白(Alb)的共振散射测定新方法 三种蛋白的线性范围分别为 0 1.17mg/L 0 1.13mg/L 0 1.13mg/L 检出限分别为 23.34µg/L 15.74µg/L 20.75µg/L 并将该方法用于人血清样品中蛋白质的测定 结果与医院双缩脲法一致 第5 章采用分光光度法研究了酸性棕NR ANR 与血清白蛋白的结合反应 在Britton - Robinson pH=2.50 缓冲溶液中 ANR 与血清白蛋白结合生成沉淀 探讨了该结合反应的最佳条件 并利用分离沉淀测定ANR 吸光度变化而建立了一 种高灵敏度的测定血清白蛋白的新方法 牛血清白蛋白 BSA 在 27.95 111.80 mg/L 人血清白蛋白 HSA 在 24.40 122.00mg/L 范围内服从比尔定律 其表 6 6 观摩尔吸光系数分别为 1.44 10 L/molcm BSA 1.32 10 L/molcm HSA 对 7 个人血清样品蛋白总量平行6 次测定 相对标准偏差0.83% 3.02% 回收率 摘 要 90.90% 109.80% 且与医院双缩脲法结果基本一致 第6 章采用共振散射光谱法研究了酸性棕SG ASG 与血清白蛋白的结合反 应 在pH 2.93 的邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲介质中 酸性棕SG 与血清白蛋白结合 形成复合物 导致470nm 处共振散射信号显著增强 据此建立了一种测定血清白 蛋白的新方法 在优化的实验条件下 牛血清白蛋白 BSA 人血清白蛋白 HSA 工作曲线线性范围分别为 0