原发先天性青光眼患者cyp1b1基因筛查和变异分析-screening and variation analysis of cyp1b1 gene in patients with primary congenital glaucoma.docxVIP

广州医学院硕士学位论文原发先天性青光眼患者 广州医学院硕士学位论文 原发先天性青光眼患者 CYP1B1 基因筛查和变异研究 3 3 摘 要 研究背景： 青光眼是世界性的第二大致盲性眼病，全世界受累人数约为 6 千 7 百万人。其中， 约 10%的患者为双眼盲。在中国，青光眼也是成年人致盲的主要原因之一。根据发病 原因的不同，青光眼可分为原发性青光眼和继发性青光眼两种。原发性青光眼又可主 要区分为三类：原发性先天性青光眼、原发性开角型青光眼和原发性闭角型青光眼。 原发性先天性青光眼（primary congenital glaucoma，PCG）是一种好发于婴幼儿 的遗传性致盲性眼病，是先天性青光眼中最为常见的类型，男女发病率比例约为 2.7:1， 多为散发，治疗效果较差，并最终导致视神经受损、萎缩而致盲，无法再次复明。该 病多同时或先后累及双眼。被认为是由于前房角特别是小梁网的先天发育异常，导致 房水的正常排流过程受阻，造成眼压病理性升高以及眼球的解剖结构和生理功能随之 受到损害或破坏的一种婴幼儿性青光眼，它也被称为原发性婴幼儿性青光眼或婴幼儿 型青光眼。PCG 发病年龄一般在 3 岁以内，是婴幼儿青光眼中最见的类型，大约每 1 万个活产儿中有一个患该型青光眼。对于 3 岁以前的儿童，由于角巩膜可塑性比较大， 因此，3 岁前即有眼压病理性升高，患儿常有典型眼角膜、眼球变大的表现，扩张变 大的眼球类似牛的眼球，故也称其为牛眼(Buphthalmos)。在排除其它眼部和全身异常 后，青少年或成人的牛眼表现可作为 PCG 的诊断依据之一。当患儿出现一侧眼睛或 双眼角膜直径12mm 或角膜出现哈氏纹、眼压2lmmHg 或出现视杯/视盘比值改变， 并有溢泪、畏光、视力下降、牛眼等临床表现时，排除其它先天异常后可确诊为 PCG。 PCG 的发病率依地域和人群不同而不同：在西方国家的发病率约为 1：10,000， 印度东南部的安得拉邦发病率要高一些，约为 1：3300，沙特阿拉伯为 1：2500，罗 马的斯洛伐克人为 1：1250，在以色列贝都因人的发病率高达 1：1200，在我国，关 于 PCG 的人群研究数据相对较少见，至今未见我国 PCG 的发病率等人群数据的报道。 对于 PCG 的发病原因和机制，到目前为止，共报道了三个与原发性先天性青光 眼相关的基因座 GLC3A、GLC3B、GLC3C，但是仅在 GLC3A 上找到了一个致病相 关基因 CYP1B1，并认为 CYP1B1 基因与原发性先天性青光眼有着密切的联系。对 CYP1B1 基因与 PCG 的相互关系进行研究为揭示原发性先天性青光眼致病基因，在分 子层面找寻 PCG 的致病原因提供线索，也为 PCG 的病因学研究带来了希望和光明。 目前关于 PCG 的研究主要都是国外学者们完成的，研究表明：CYP1B1 基因编码细胞 PAGE PAGE 4 色素 P4501B1，是导致 PCG 的最主要原因。在国内，PCG 相关报道尤其是关于 PCG 和 CYP1B1 基因的研究报道较为少见，因此，研究中国人 PCG 患者与 PCG 致病相关 基因 CYP1B1 基因的关系具有重要意义。 目的： 1. 运用高分辨率熔解曲线方法检测 CYP1B1 基因高频变异区域； 2. 广东地区汉族正常人 CYP1B1 基因序列的获取及其序列特点分析，对于我们了解 中国广东地区汉族正常人 CYP1B1 基因序列及其特点，掌握正常人 CYP1B1 基因 基础数据十分重要。该数据的获取将为广东地区人群 CYP1B1 基因的研究提供正 常人群基础数据，为 CYP1B1 基因与相关疾病特别是 PCG 的相关研究提供基础正 常参照数据，对筛选 CYP1B1 基因疾病相关变异提供正常对照对照，为探讨 CYP1B1 基因与 PCG 之间的关系奠定基础； 3. 在广东地区汉族正常人 CYP1B1 基因序列的基础上，找寻 PCG 患者 CYP1B1 基因 除热点突变区域以外的可能的与 PCG 疾病相关的基因变异位点。 材料及方法： 抽取外周静脉血制备基因组 DNA，采用聚合酶链反应(Polymerase chain Reaction， PCR)及高分辨率熔解曲线方法（High- Resolution Melting, HRM）对 CYP1B1 热点 突变区域进行筛查。对所筛查片段进行直接测序，以验证 HRM 的检测结果； 2. 采用聚合酶链反应对正常对照 CYP1B1 全基因进行扩增、测序、序列拼接、同源 对比性分析、多系列比对分析、变异位点归纳，为中国广东地区汉族 CYP1B1 基 因变异引起 PCG 发病提供对照； 3. 采用聚合酶链反应对 PCG 患者 CYP1B1 全基因进行扩增、测序、序列拼接、同源