水质全分析实验指导书高效液相色谱法测定水样中的苯甲酸.docxVIP

实验一 高效液相色谱法测定水样中的苯甲酸一、实验目的1.通过对高效液相色谱法测定样品中的苯甲酸2.掌握采用高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法3. 掌握外标法的步骤和计算方法二、实验原理苯甲酸和苯甲酸钠是食品行业通用的防腐剂，是我国目前最常用的食品防腐剂，其主要作用是防止由微生物的活动而引起的食品变质。据科学报道，目前影响我们食品安全的最大问题是食品腐败和微生物的繁殖，正是由于食品中使用了防腐剂，而使我们避免了更多食品中的不安全因素。面粉中添加了增白剂最终转化成的苯甲酸不超过60 ppm，我国GB2760－1996《食品添加剂卫生使用标准》中规定，苯甲酸及苯甲酸钠在酱油、醋中的最大使用量为1000 ppm，葡萄酒中为800 ppm，碳酸饮料中为200 ppm。苯甲酸分子式为：苯甲酸具有紫外吸收特性，可用紫外检测器进行检测。标准品或待测样品进入液相色谱之后，经反相色谱柱分离，紫外检测器检测，可获得以保留时间为横坐标，紫外信号（电压或电流）为纵坐标的色谱图，不同物质保留时间不同，并且物质浓度与色谱峰面积成正比。本实验通过高效液相色谱采用外标法对常见饮料（如雪碧）中苯甲酸进行测定（实际样品测定之前必须进行过滤），根据保留时间和峰面积进行定性和定量。外标法常用于测定主要成分含量，是以待测组分的纯品作为对照品，以对照品和待测组分的保留时间和峰面积相比较进行定性和定量分析，外标法包括工作曲线法和外标一点法，本实验采取工作曲线法。配置5个不同浓度的纯品，分别进行色谱分析，得到峰面积和浓度的线性关系表达式。将待测组分峰面积代入公式，得到待测组分浓度。三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；C18色谱柱；容量瓶（50mL）、10ml比色管、10ml移液管、胶头滴管、洗耳球、小烧杯、针筒过滤器、2ml进样瓶。试剂：苯甲酸（分析纯）；乙腈（色谱纯）；重蒸馏水。四、实验步骤1.按仪器操作规程开机，设定流动相为乙腈/水=60/40，平衡色谱柱。2. 标准样品溶液的配制（1）1 g/L的苯甲酸溶液：准确称取100mg苯甲酸，用乙醇溶解后转入100ml容量瓶中并定容，混匀。（每班一个）（2）10 mg/L苯甲酸溶液：用1ml移液管准确移取1 g/L的苯甲酸溶液0.5 ml入50ml容量瓶，加纯水至刻度线，混匀。（每大组一个）（3）分别取10mg/L的苯甲酸溶液2、4、6、8 ml至10ml比色管中，定容至刻度线获得浓度分别为2，4，6，8 mg/L。（4）将配制好的标准溶液倒入2ml进样瓶（2、4、6、8、10 mg/L共5个浓度）。3. 待测样品的前处理提前购买听装雪碧，稀释20倍（取0.5 ml至10ml比色管，用水稀释至刻度线），用注射器取5ml左右，用针筒过滤器过滤至2ml样品瓶中。4. 进样分析（1）建立液相色谱测定方法色谱柱：C18柱（规格）；流动相：水-乙腈（40：60）；流速1.0mL/min，检测波长230nm；柱温20 oC，进样量10ul。按照上述色谱条件建立液相色谱测定方法，并保存。（2）将标准样品和待测样品放入自动进样器中，将样品名称、数据保存位置、样品放置位置、测定方法等信息输入测定序列，编辑好序列后保存序列。（3）运行序列开始测定。五、数据处理根据工作溶液浓度和峰面积的关系作出校准曲线（以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标），C=ax。其中：C——苯甲酸的浓度（mg/L），X——峰面积（软件自动积分获得），a——斜率。根据测试样品的峰面积值可计算出其中苯甲酸的浓度C待测=tax待测，其中：C待测——待测样品中苯甲酸的浓度（mg/L）t——待测样品的稀释倍数x待测——待测样品经稀释后测得的峰面积计算结果保留至小数点后两位。六、问题讨论1.高效液相色谱一般由几部分组成？2.反相色谱和正相色谱有什么区别？实验二物质成分的毛细管气相色谱分析-----苯甲醇的相对校正因子测定一、实验目的掌握气相色谱内标法的定量依据；掌握气相色谱仪的结构和使用方法；熟悉相对校正因子的测量方法。二、实验原理苄醇是重要的有机中间体。目前检测苄醇的标准方法是气相色谱内标法定量。内标法是将一种纯物质作为内标物加到试样中，进行色谱分析，根据待测物质和内标物的质量及其在色谱图上响应的峰面积和校正因子，求出待测组分含量的一种方法。由于内标物加到试样中，它与待测组分的处理条件相同，因而在一定程度上可以克服样品前处理、进样量和仪器条件不一致等引起的误差，是一种比较准确的定量方法，特别适合于复杂样品和微量组分的定量分析。三、仪器与试剂仪器：气相色谱仪（带FID）；Agilent毛细管柱；微量注射器（10μL）；3个滴瓶（分别用于盛放苯甲醇、邻苯二甲醚和无水乙醇）。试剂：苯甲醇（分析纯）；内标物邻苯二甲醚（色谱纯）；无水乙醇（分析纯）；丙酮（清洗进样针）。四、实验步骤试剂配置（1