生物质谱技术研究及其在蛋白质组学中的运用.pdfVIP

作者自述：我是一匹来自西北的“狼”，满怀激动的心情，在复 旦开始学习蛋白质化学和参加蛋白质组学相关的研究课题。两年的学 习生活，有快乐的巅峰，有彷徨的进退，也有失落的底谷。两年的复 旦经历是人生的一笔财富，它将是未来灿烂人生的基石。所以，我最 想说：感谢您——复旦。 中文摘要：本研究包括两方面的工作：纳升喷雾装置的研制及其在蛋白质组学 中的应用和稳定同位素化学标记新方法的探讨。放置金属丝穿过玻璃喷头中是一 种提供电接触的简单方法，为了克服使用细金属丝难于操作的局限，我们采用相 对粗的金属丝并将玻璃喷头制作成一端带有很长的玻璃丝以减缓分析液的喷雾 nL／min。纳 流速。这一改进的纳升喷雾头能长时间稳定喷雾，喷雾流速80-120 min喷雾浓度为25 升喷雾头有很好的检测灵敏度，30 pg／laL利血平溶液其准分 子离子峰的平均信噪比(S／N)为42。改迸的纳升喷雾头可用于分析标准蛋白质 溶液酶解及胶上酶解肽，消耗不足1微升样品便可实施蛋白鉴定：还可分析实际 蛋白样品，选择了7个由两维凝胶电泳分离的人类U937细胞裂解液的蛋白质点， 其鉴定结果明显好于相应的LC／MS鉴定结果。同时，我们探讨了在纳升喷雾过 程中添加一辅助电极对纳升喷雾的影响，发现辅助电极的存在可显著改善纳升喷 雾的信噪比，辅助电极存在下电场分布的模拟计算也支持了这一结果。基于金属 丝提供电接触的纳升喷雾头最大缺陷是难于和其它设备在线连接，为了弥补这一 不足，我们制作一种喷雾装置。此装置借助于不锈钢三通将玻璃喷头和金属丝有 效的相连接，三通的其中一个入口作为气体通路，允许气体辅助样品装载。此装 置通过石英毛细管可于其它设备在线连接。在此装置中金属丝无须穿过玻璃喷 头，因而允许玻璃喷头保持极小的喷雾口径，这一安排使纳升喷雾有更低的分析 min喷雾浓度为25 液流速30一60nL／min和更高的检测灵敏度。25 p∥gL利血平 溶液其准分子离子峰的平均信噪比(s／N)为179。浓度为1ng／gL的肌红蛋白和 细胞色素C溶液酶解肽可进行蛋白鉴定，浓度为5 ng／laL的细胞色素c可提供十 分满意的纳升喷雾的质谱图。我们比较了酸性、中性和碱性介质中蛋白溶液酶解 肽喷雾的差异，此外将喷雾装置与一注射泵连接用来监测有机化学反应的发生。 稳定同位素化学标记新方法的探讨致力寻找简单、有效的同位素化学标记方 法。我们改进了传统的氨基酸／肽季铵化方法，用碳酸银替代碳酸氢钾催化季铵 化反应的发生。改进的季铵化反应以氨基酸／肽季铵化的季铵化酯化产物为主， 反应体系中无大量金属离子，因而可用质谱现场检测反应产物。此外，我们制备 一个具有很好选择性的乙酰化试剂。改进的季铵化反应及选择性的乙酰化试剂在 定量蛋白质组学中的应用有待迸一步研究。 关键词：电喷雾质谱、纳升电喷雾、蛋白质组学、定量蛋白质组学、溶液酶解、 胶上酶解、稳定同位素标记、季铵化、乙酰化。 Abstract：Thiswok focusedonthe of deviceand development itsusein nanospray the proteomics，and alternative investigation stable method． o，f isotope，labeling ametalwire a isa Inserting