巨噬细胞增强表达诱骗受体il 13rα2及其在血吸虫病免疫病理调节中作用-macrophage enhances expression of decoy receptor il 13rα 2 and its role in immune and pathological regulation of schistosomiasis.docxVIP

sIL-13Rα2-Fc后可明显改善纤维化程度，表明纤维化程度加重与IL-13活性增高有关。IL-13Rα2具有下调曼氏血吸虫肉芽肿炎性反应、延长感染鼠寿命等保护性作用。鉴于曼氏血吸虫与日本血吸虫病理机理不尽相同，有关日本血吸虫病IL-13Rα2的研究尚未见报道。更重要的是，Th2细胞因子通过细胞膜上受体实现信号传递，血吸虫感染的机体IL-13应答细胞及其生物学效应尚未阐明。本课题首先以鼠动物模型研究日本血吸虫病感染过程IL-13Rα2表达水平；进一步建立日本血吸虫感染BALB/C鼠巨噬细胞失活模型，通过研究巨噬细胞失活后IL-13Rα2表达变化及肝脏病理改变，探讨肉芽肿IL-13Rα2阳性表达细胞及其免疫病理调节作用。我们的研究内容主要包括二部分：1.日本血吸虫感染诱导小鼠诱骗受体IL-13Rα2表达水平升高采用经腹部皮肤人工感染活尾蚴方法，建立BALB/C鼠日本血吸虫病模型，ELISA法检测血清可溶性IL-13Rα2蛋白动态水平；以IL-13Rα2核苷酸序列（小鼠AccessionnumberNM008356）cDNA为模板设计、合成引物，RT-PCR法扩增肝组织IL-13Rα2基因，获取目的片段；Westernblotting检测同期肝组织蛋白表达情况。结果表明：感染鼠血清IL-13Rα2可溶性蛋白水平明显升高，感染后6周达高峰，其后略有下降；PCR法从感染鼠肝脏扩增出胞外区IL-13Rα2mRNA800bp片段；Westernblotting检测结果显示，肝脏出现特异性IL-13Rα2蛋白条带，相对分子量位于35-49KD之间。因此，日本血吸虫感染诱导机体IL-13Rα2基因转录和蛋白表达增强。2.肉芽肿巨噬细胞特异性增强表达IL-13Rα2及其免疫病理调节作用1)体外实验检测巨噬细胞IL-13Rα2表达水平分离、培养腹腔巨噬细胞，RealtimePCR法分析感染鼠巨噬细胞IL-13Rα2mRNA水平变化（与正常对照组比较）；免疫荧光双标法检测IL-13Rα2与CD68共表达情况。结果表明：感染鼠巨噬细胞IL-13Rα2、collagen?基因水平分别是正常鼠6倍、2.5倍，差异具有显著性(P0.01)。细胞免疫荧光染色显示，IL-13Rα2与巨噬细胞标志蛋白CD68呈一致性共表达。体外实验证明：血吸虫感染鼠腹腔巨噬细胞是IL-13Rα2阳性表达细胞。2)体内实验清除IL-13Rα2阳性巨噬细胞具有下调肉芽肿炎性反应和抑制纤维化作用进一步我们给感染血吸虫病BALB/C鼠多次尾静脉注射巨噬细胞清除剂GdCl3，建立巨噬细胞失活日本血吸虫病模型，于感染后42天行门静脉灌流术分离肝脏，对肝组织进行目的基因和组织形态学研究。根据荧光镜下肝肉芽肿ED1免疫阳性信号消失判定模型的成功。其后，三重荧光标记法检测ED1阳性细胞与IL-13Rα2阳性细胞的一致性分布以及TaqManPCR分析基因水平差异情况。结果表明：IL-13Rα2在肉芽肿巨噬细胞特异性增强表达；IL-13Rα2阳性巨噬细胞的消失或失活，小鼠肝脏肉芽肿炎性反应减轻，同期纤维化程度降低。综合我们的研究资料，支持以下结论：日本血吸虫感染诱导机体IL-13Rα2基因转录和蛋白表达增强。肉芽肿巨噬细胞特异性增强表达IL-13Rα2蛋白。清除IL-13Rα2阳性巨噬细胞具有降低肉芽肿炎性反应和减轻纤维化作用，IL-13Rα2+巨噬细胞具有调节肉芽肿免疫病理等重要作用。因此，巨噬细胞增强表达诱骗受体IL-13Rα2可能是血吸虫病肉芽肿及纤维化病理重要调节分子，为Th2相关纤维化疾病基因治疗和侯选细胞靶标的筛选等提供理论依据。【关键词】血吸虫病巨噬细胞IL-13R肉芽肿肝纤维化AnenhancedexpressionofthedecoyreceptorIL-13Rα2inmacrophagesanditseffectsonimmunopathogenesisofSchistosomiasisjaponicumPH.Dcandidate:WANGWeiSupervisor:JIANGZuo-junandSHENJi-longDepartmentofEpidemiologyandBiostatistics,SchoolofPublicHealthDepartmentofMicrobiologyandParasitology,AnhuiMedicalUniversity,Hefei230032ABSTRACTInterleukin(IL)-13andIL-13receptor(R)α2appeartoplayamajorroleintissuefibrosisofschistosomiasisandasthma.IL-13isproducedbyThelper2(Th2)cells.Th