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酒泉地区婴幼儿腹泻轮状病毒感染及其型别研究 　　摘 要 目的：通过分子流行病学调查，研究酒泉地区婴幼儿轮状病毒(RV)腹泻的分型特点。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)，对2001年11月～2002年12月酒泉地区收集的324例婴幼儿腹泻粪便标本中的204份进行轮状病毒病原检测，并对阳性标本进行分型。结果：ELISA法RV阳性率为54.9%，阳性率与性别无关。不同年龄段的感染率以7～18个月年龄段最高，但各年龄段间差异无显著性意义。不同月份的感染率差异具有显著性意义，发病高峰在2001年11、12月份和2002年10、11月份。在ELISA阳性标本中RT-PCR法检出G3者50例，G1者16例、G2者6例，G9者2例，G3与G1混合感染6例，G3与G2混合感染2例，30例未能分型。G分型阳性标本中检出P[8]型24例，P[4]型14例，未发现P[6]、P[9]、P[10]。结论：轮状病毒是酒泉地区婴幼儿非细菌性腹泻的主要病原，其流行的主要血清型为G3型及G1型。本次研究结果从分子水平初步揭示了酒泉地区轮状病毒的流行情况，为轮状病毒疫苗在该地区的应用提供了流行病学资料。 　　关键词 腹泻 婴幼儿 轮状病毒 分子流行病学 基因型 　　 　　资料和方法 　　 　　2001年11月～2002年12月共采集酒泉市人民医院儿科门诊和住院部婴幼儿腹泻粪便标本324例，置-70℃保存备用。采用SPSS 11.0软件随机抽样选取204例标本进行检测。 　　用ELISA法检测RV抗原，采用IDEIATM Rotavirus试剂盒，购自英国DakoCytomation Ltd，按说明书操作。 　　用RT-PCR法对RV病毒株进行血清株与基因型的鉴定，Taq DNA聚合酶和AMV逆转录酶购自美国Promega Corporation；RNA酶抑制剂(RNasin)购自宝生物工程(大连)有限公司；TRIZOL购自Molecular Research Center Inc．；dNTPs购自sbs赛百盛公司；DNA Maker DL 2,000购自宝生物工程(大连)有限公司。采用PTC-100TM PCR仪(美国MJ RESEARCH公司)进行PCR反应。用TRIZOL提取RV核酸。先逆转录合成病毒cDNA，后巢式PCR对RV标本进行分型，方法见文献[1]。 　　每批分别用已测序证实的粪便标本作为阳性和阴性对照。 　　统计学方法：采用SPSS 11.0进行统计，计量资料用均数±标准差表示，两组比较采用非配对t检验，计数资料采用X2检验。 　　 　　结 果 　　 　　RV腹泻的???龄分布：本研究共采集酒泉市人民医院就诊婴幼儿腹泻粪便标本324例，电脑随机抽样选取204例标本(年龄11.28±7.76个月)进行检测，ELISA法检测RV阳性112例，阳性率为54.9％。其中住院部患儿34例，门诊78例；男68例(年龄11.46±7.54个月)，女41例(年龄11.49±6.52个月)，经非配对t检验显示两组间年龄差异无显著性意义(P0.05)，经X2检验显示RV阳性率也与性别无关(P0.05)。在所检出的112份RV阳性标本中，RV腹泻年龄范围2～24个月，平均11.16±7.21个月；在不同年龄段中以7～18个月年龄段RV阳性率最高，为62.07%～72.73%，但经Pearson Chi-square检验显示不同年龄段间的阳性率差异无显著性意义 (P0.05)。 　　RV腹泻的流行季节：从连续13个月收集的204例腹泻患儿每月轮状病毒阳性检出率可见，酒泉地区婴幼儿轮状病毒腹泻全年均有发病，经X2检验显示不同月份的阳性检出率差异具有显著性意义 (P[1,2]，说明RV感染存在明显的地域差别。酒泉地区在此研究期间型别主要集中在G3型，其次为G1型。由于轮状病毒型别繁多，相互之间的交叉保护作用差，因此在研制疫苗时必须考虑到涵盖相应的型别。 　　不同方法检测轮状病毒的比较：在进行VP7和VP4基因分型时，有相当一部分ELISA阳性标本，在做RT-PCR扩增时结果为阴性。在扩增VP7或VP4时都有这种现象，考虑部分是因为在处理过程中RNA丢失，或非特异性抑制物处理不完全，或部分标本中病毒dsRNA降解和含量太少，因此RT-PCR不能对部分RV dsRNA进行扩增。如果单纯是为了作出轮状病毒感染的诊断，用ELISA法检测RV病毒抗原即可。ELISA法具有方便、价廉的优点，但由于粪样中成分繁杂，存在其他抗原成分，干扰轮状病毒抗原抗体的结合，所以结果有一定的误差，可能出现假阳性或假阴性。本研究中ELISA法检测的阳性率最高，但和RT-PCR法检测结果不符的例数也较多，证实了这点。RT-PCR具