人体尿液中黄蝶呤与异黄蝶呤的分析方法的研讨及其应用.pdfVIP

摘要 ＼憾y删,17厶,6607 摘要 癌症是威胁人类生命的重大疾病之一，寻找疾病早期诊断方法是提高其治 愈率的有效手段之一。蝶呤类化合物(包括黄蝶呤、异黄蝶呤、蝶呤、新蝶呤、 生物蝶呤、蝶呤．6．羧酸)属于蝶啶的衍生物，分布于整个生物界，在细胞代谢 过程中起着重要的辅助作用，其含量水平的变化在临床诊断上具有重要的价值。 在蝶呤类化合物中，以新蝶呤研究较为深入，并已应用于临床上包括癌症在内 的多种疾病的诊断，而其它蝶呤类化合物相对研究较少。 本论文应用色谱分析技术，研究建立了人体尿液中黄蝶呤、异黄蝶呤三种 分析新方法，并选择其中一种方法应用于大量健康人及癌症病人尿样分析，通 过T检验发现，和健康人相比，癌症病人尿液中黄蝶呤和异黄蝶呤水平存在显 著性差异。同时采用三维荧光光谱技术获得了不同人群尿液的指纹图谱，结合 主成分分析的投影判别法和聚类分析法对尿样三维荧光谱的特征参数进行了模 式识别研究。本文主要研究结果如下： 1．建立了高效液相色谱．荧光分析同时测定人体尿液中的黄蝶呤与异黄蝶 呤的分析新方法。以磷酸盐缓冲溶液(PH=7．5)．甲醇(98：2，v：v)为流动相， nm，kem=420 流速为1．0mL／min，荧光检测波长kex=345 nl／l。黄蝶呤含量在 0．0013肛咖L～O．945I．tg／mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，线性回归 方程为y-=3．Oxl06x+28959，相关系数为0．9999，检测限为0．5ng／mL；异黄蝶呤 18 含量在0．00017“咖L～O．1I,g／mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系， X．162133，相关系数为0．9996，检测限为0．05 线性回归方程为y=1．O×103 ng／mL。 平均加标回收率分别在83．9％～106．0％之间，相对标准偏差小于7．9％。尿液 前处理方法简单，易操作。该方法用于人体尿液中黄蝶呤与异黄蝶呤的分析， 结果良好。 2．建立了高效液相色谱．电喷雾质谱(HPLC．ESI．MS)同时测定人体尿液中 黄蝶呤与异黄蝶呤的分析方法。尿样经离心、过膜后直接进样，采用电喷雾质 谱定性及定量。结果表明，黄蝶呤与异黄蝶呤浓度分别在0．0204肛舢～2．04 “g／mL及0．0202I．tg／mL-2．02gg／mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系， J．tg／mL。黄蝶呤与异黄蝶呤 (r2=0．9997)，检测限分别为0．007肛g／mL和0．006 摘要 加标平均回收在88．O％～110．O％之间。该方法前处理方法简单，易操作，应用 于实际尿样分析，结果良好。 3．建立了高效阴离子交换色谱．积分脉冲安培测定人体尿液中异黄蝶呤的 分析方法。尿液经ENVI．18与732型阳离子交换柱串联萃取后，除去了大量干 Iilln×250 扰物质。采用IonPac mm)，以0．020mol／LNaOH AS21分析柱(2 溶液为淋洗液，流速为O．40mL／min，在优化的安培检测波形条件下，异黄蝶呤 在0．005 1．tg／mL～0．200 pg／mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数 为0．9984，检出限为0．003．g／mL。健康人及癌症病人尿液在2．00lxg／mL和5．00 J-tg／mL两个添加水平的平均回收率在95．4％～96．8％之间，相对标准偏差小于5％。 此方法环保、快速、准确，可用于健康人与癌症病人尿液中异黄蝶呤的测定。 4．运用高效液相色谱．荧光分析法对34个健康人，29个胃癌病人及14个 其它癌症病人的尿样中黄蝶呤与异黄蝶呤进行测定，通过T检验发现，与健康 人相比，胃癌及其它癌症病人尿样中黄蝶呤和异黄蝶呤的水平存在显著性差异