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MiRNA及其与肺癌早期诊断新认识 　　【摘要】 MicroRNA（MiRNA）是一类长约18～22个核苷酸的小分子非编码RNA，能调节转录后靶基因的表达，其在机体内的生长发育，细胞繁殖、代谢、凋亡等生理过程中发挥着重要作用。MiRNA具有癌基因或抑癌基因的双重作用，且具有组织特异性。MiRNA表达水平的变化与肿瘤形成密切相关。肺癌是严重危害人类健康的疾病，其发病率和病死率已占全球恶性肿瘤的首位。其恶劣预后多归因于早期诊断能力差和治疗效果欠佳。近年来，在肺癌诊断中具有高度敏感性和特异性的MiRNA备受关注。作为血清标志物，MiRNA将为肺癌早期诊断提供了新的重要的途径。 　　【关键词】 微小RNA； 肺癌； 早期诊断 　　肺癌是导致全球癌症死亡的最主要原因，每年因肺癌死亡的人数超过100万，且每年新增病例120万。肺腺癌是最常见的癌症，其中，约80%的肺癌是非小细胞肺癌（non small cell lung cancer，Nsclc），尽管手术、放疗、化疗技术不断提高，但Nsclc的总体生存率仍小于20%[1]。被认为是目前对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤 。微小RNA（micro RNA，MiRNA）是一类分子量为22个核苷酸左右的内源性非编码RNA，于1993年被首次认识，是细胞发育、凋亡和代谢等多种维持生命必需的生物学功能调节因子，MiRNA调节人类近30%的基因表达[2]。在基因组上，约有超过50%的MiRNA定位于与肿瘤相关的脆性位点（fragile site）[3]。Small等[4]研究表明，MiRNA已成为许多重要生物过程的主要调节因子，在肿瘤和心血管疾病发生发展中发挥了重要作用。现就MiRNA的分子生物学研究及其与肺癌早期诊断关系的新认识综述如下。 　　1 MiRNA概述 　　继1993年在果蝇中发现第一个MiRNA以来，现已有15172个MiRNA相继在脊椎动物、蠕虫、果蝇、植物和病毒等142个物种被发现，通过克隆技术（Cloning technology）、深度测序（deep Sequencing）以及复杂的生物信息学和遗传筛选等方法，发现并鉴定在人类基因组中可能存在的1000个MiRNA[5]，参与生命过程中一系列重要进程，包括发育、增殖、分化和凋亡等。 　　1.1 MiRNA的分子生物学特征 （1）MiRNA的长度为18～22 nt，在3’端可以有1～2个碱基的长度变化。（2）MiRNA为单链结构，其5’端有一个磷酸基团，3’端??羟基，该结构特点是使其与功能RNA的降解片段和大多数寡核苷酸保持区别。（3）MiRNA具有较强的同源性，来自不同基因簇的MiRNA的同源性较弱，其表达具有组织特异性和时间特异性。（4）MiRNA广泛存在于真核生物基因组中，其本身不具有开放阅读框架，是一组非编码蛋白质的短序RNA[6]。 　　1.2 MiRNA的生成及作用机制 MiRNA的生成过程包括转录、加工成熟及功能复合体装配几个主要步骤。研究表明，MiRNA的生成和作用须要经历两个阶段：（1）MiRNA基因经RNA聚合酶Ⅱ的作用转录生成初级MiRNA（pri—MiRNA），再由RNA聚合酶Ⅲ—Dorsha—DGCR8复合体进行切割形成前体MiRNA（pre—MiRNA），在细胞内完成[7]。（2）在核酸酶Dicer（属于RNaseⅢ家族）、RNA聚合酶Ⅲ及旋解酶的共同作用下将其剪切为21～23个核苷酸长度的双链MiRNA，最后，双链MiRNA被降解，其中5’端相对不稳定的一条链被结合到核蛋白复合体并参与形成RNA诱导的沉默复合体（RNA—induced silencing complex，RISC）[8]，而另一条链随即被降解，进入RISC的MiRNA直接与Argonaute（AGO）家族的蛋白质结合，作为“向导”分子介导RISC剪切靶基因mRNA使其降解，或结合到靶基因mRNA的3’UTR抑制靶基因mRNA翻译，从而在多种生物学过程中发挥功能[6]。 　　2 MiRNA在肿瘤发生发展中的作用 　　MiRNA在转录后水平调控基因的表达。超过半数的MiRNA定位于与肿瘤相关的脆性位点[3]。近期，Zimmerman等[9]研究认为MiRNA通过调控靶基因的表达进而参与一系列生理和病理进程包括调节细胞自我更新、凋亡、干细胞分化和肿瘤的发生及转移等。不同类型肿瘤有不同组合的异常MiRNA表达谱。MiRNA可通过类似癌基因和抑癌基因的作用参与肿瘤发生、发展和转归过程 [10]：（1）具有癌基因作用的MiRNA，通常处于静止或低表达状态，其活化可导致细胞癌变。在肿瘤组织中，某些MiRNA表达水平明显上调，表现出癌基因的特征。（2）具有抑癌基因作用的MiRNA：具有抑制细胞过度生长和繁殖，遏制肿瘤形成，其失活亦可导致肿瘤的