《现代食品微生物学》 实验：微生物多糖-黄原胶的发酵 上海海洋大学 硕士课程 宁喜斌 欧杰PPT.pptVIP

微生物多糖-黄原胶的发酵与提取;一、实验目的;二、实验原理; 该菌在人工培养基上生长并分泌黄原胶。利用葡萄糖、蔗糖、玉米淀粉等多种碳水化合物为碳源，利用NH4NO3、黄豆饼粉、蛋白胨、鱼粉等为氮源，需要K2HPO4、MgSO4、CaCO3等无机盐，需要Fe3+、Mn2+、Zn2+等微量元素。Mg2+、Ca2+、谷氨酸、柠檬酸、延胡索酸可促进黄原胶生物合成。该菌为好氧菌，生长最适温度25-28℃，最适pH为6.8。在平板培养基上，形成粘稠、光滑、黄色菌落。形成荚膜，其主要成分即为黄原胶。液体培养，菌体细胞分泌黄原胶，培养液成为粘稠黄色胶状物。 ;; 野油菜黄单胞菌细胞（1000倍） 野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)是寄生在甘蓝根部患黑腐病的植物致病菌，呈杆状[0.5μm×(1.0-1.5) μm]，G-，偏端单生鞭毛，无芽孢，有荚膜，无规划单细胞排列，分泌黄色素，故称黄单胞菌。 ;不同发酵时期试验组和对照组的菌体电镜照片 (放大倍数10，000倍) ;2. 培养基： 固体平板（斜面）培养基（%，W/V） 蔗糖 1.0；牛肉浸膏 0.5；蛋白胨 0.3；酵母浸膏 0.1；琼脂粉 2.0 液体种子培养基(%,W/V) 蔗糖 1.0；蛋白胨 0.5；牛肉浸膏 0.3；酵母浸膏 0.1 摇瓶发酵培养基(%,W/V) 玉米淀粉 4.5；牛肉浸膏 0.15；K2HPO4 .3H2O 0.05; CaCO3 0.3; 大豆 0.3 罐发酵培养基(%,W/V) 玉米淀粉 5 ，其它同摇瓶发酵培养基。 以上培养基均调pH至 7.2，121℃湿热灭20min。;3.试剂和用具： 95%乙醇、三角烧瓶、培养皿、烧杯、漏斗、接种针、无菌吸管、烘箱、摇床、微量取样器、天平、尼龙布、不锈钢勺 ;四、实验步骤;3. 发酵液培养结束后，将发酵液移入500mL烧杯 内，因发酵液粘稠，需用不锈钢药勺，仔细刮取 （可加入少量95%乙醇于发酵三角烧瓶，将残留 的多糖洗入烧杯内），在烧杯内加入2被体积的95% 乙醇，用玻棒搅动，多糖析出。经带有尼龙布的漏 斗过滤后弃去乙醇。挤压尼龙布除去残留乙醇。再 用95%乙醇洗涤多糖两次。 ;4. 将洗涤后的多糖置于培养皿中（不加盖）， 于60℃烘箱内烘干，称重，计算多糖的率。 计算公式： 多糖得率（%） =[多糖重量（g）/发酵液体积（mL）] ×100