第7章 微生物的遗传与变异PPT.ppt

3.重组修复： 必须在DNA复制的情况下进行，所以又叫复制后修复。 细胞在不切除二聚体的情况下，以带有二聚体的这条链为模板合成互补单链，但在每个二聚体附近留有一空隙。通过染色体交换，空隙部位就不在面对着胸腺嘧啶二聚体，而是面对着正常的单链，在这种条件下，DNA聚合酶和连接酶起作用将空隙部位进行修复。 重组修复中的DNA损伤并没有去除，但随着微生物的传代繁殖，损伤的比例逐渐降低。 4. SOS修复 SOS （国际通用的紧急呼救信号）修复是指紧急修复。 SOS 是一组基因，它是 DNA 修复最重要最广泛的基因集团，通常称为 DNA 紧急修复基因 (SOS DNA repair gene) ，它们为 DNA 的损伤所诱导。这些修复基因包括 recA 、 lexA 、 uvrA 、 uvrB 、 uvrC 等。 这些基因在 DNA 未受重大损伤时受 LexA 阻遏蛋白的抑制，使 mRNA 和蛋白质合成都保持在低水平状态，只合成少量 Uvr 修复蛋白用于零星损伤修复。一旦 DNA 受到重大损伤，少量存在的 RecA 蛋白立即与 DNA 单链结合，结合后其修复活性被激活，激活的 RecA 蛋白切除 LexA 阻遏蛋白，使基因得以修复表达，产生的修复蛋白对损伤的 DNA 部分（如形成的二聚体）进行切除而修复整个 DNA 。因此 SOS 修复是 DNA 分子受到重大损伤时诱导产生的保护 DNA 分子的一种应急反应。 五、诱变与育种 （一）自发突变与育种 1、从生产中选育 2 、定向培养优良菌种 一般是指用某一特定环境长期处理某一微生物培养物，同时不断对它们进行移种传代，以达到积累和选择合适的自发突变体的一种古老育种方法。 （二）诱变育种 诱变育种就是利用物理和化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群，大幅度提高突变频率，然后设法采用简便、快速和高效的筛选方法，从中挑选少数符合育种目的的突变株。 1 基本环节 诱变育种 2、诱变育种的原则 （1）使用简便有效的诱变剂 诱变剂 物理因素 化学因素 紫外线 激光 离子束 X射线 r射线 快中子 烷化剂 碱基类似物 吖啶化合物 （2）选用优良的出发菌株 （3）处理单细胞或单孢子悬浮液 （4）使用最佳诱变剂量 剂量 = 强度（浓度）× 作用时间 相对剂量 = 杀菌率 （5）利用协同效应 （6）寻找和利用形态、生理与产量间的相关指标 （7）设计高效率筛选方案 （8）根据具体情况创造新型筛选方案 第三节 基因重组和杂交育种 一、原核生物的基因重组 供体菌 受体菌 DNA片段 1928年，Griffith发现肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae） 的转化现象,目前已知有二十多个种的细菌具有自然转化的能力 进行自然转化，需要二方面必要的条件： （一）转化 1、建立了感受态的受体细胞 感受态细胞：具有摄取外源DNA能力的细胞 自然感受态的出现是细胞一定生长阶段的生理特性，受细菌 自身的基因控制； 人工感受态则是通过人为诱导的方法，使细胞具有摄取DNA的 能力，或人为地将DNA导入细胞内 2、外源游离DNA分子（转化因子） 人工转化 用CaCl2处理细胞，电穿孔等是常用的人工转化手段。 在自然转化的基础上发展和建立的一项细菌基因重组 手段，是基因工程的奠基石和基础技术。 不是由细菌自身的基因所控制； 用多种不同的技术处理受体细胞，使其人为地处于一 种可以摄取外源DNA的“人工感受态”。 质粒的转化效率高； 转化过程的特点： a）对核酸酶敏感； b）不需要活的DNA供体细胞； c）转化是否成功及转化效率的高低主要取决于转化供体菌株和转化受体菌株之间的亲源关系； d）通常情况下质粒的自然转化效率要低得多 噬菌体DNA被感受态细胞摄取并产生有活性的病毒颗粒 转染的特点：提纯的噬菌体DNA以转化的（而非感染）途径进入细胞并表达后产生完整的病毒颗粒。 （二）细菌的转导（transduction） 由噬菌体介导的细菌细胞间进行遗传交换的一种方式 一个细胞的DNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中 细菌转导的类型 普遍转导 局限转导 完全普遍转导 流产普遍转导 低频转导 高频转导 普遍转导（generalized transduction） 噬菌体可以转导供体菌染色体的任何部分到受体细胞中的转导过程 普遍性转导的三种后果： 外源DNA被降解，转导失败。 进入受体的外源DNA通过与细胞染色体的重组交换 而形成稳定的转导子 流产转导 局限转导 温和噬菌体感染 整合到细菌染色体的特定位点上 宿主细胞发生溶源化 溶源菌因诱导而发生裂解时， 在前噬菌体二侧的少数宿主 基因因偶尔发生的不正常切 割而连在噬菌体DNA上 部分缺陷的温和噬菌体