第一专题基因工程PPT.ppt

第二章 基因工程 genetic engineering;一、基因工程的概念及其发展 二、重组DNA技术的一般程序 三、常用工具酶和载体 四、目的片断的获取 五、目的基因导入受体细胞 六、克隆子的筛选和鉴定;;;;能否把这些植物的特点集中在一种植物上？;物种间存在生殖隔离;1、基因工程的概念;2、基因工程的理论依据;3.基因是可以转移的 自然情况下即存在着基因转移的现象，如跳跃基因，减数分裂时等位基因之间的转移（或交换）。 4.多肽与基因之间存在对应关系 可以保证基因转移后，其产物不变。 5.遗传密码是通用的 可以保证产物的正确表达。 6.基因通过复制把遗传信息传递给下一代 保证转基因生物的稳定性。;3、基因工程的发展史：;1970年前后，限制性核酸内切酶和DNA连接酶等被发现 内森斯、史密斯 ;;;;（2）基因工程的迅速发展 ;转基因植物：;;我们国家： 已经有6种转基因植物被批准进入商品化生产，包括我国自己培育的耐储存番茄（1997）、抗虫棉（1997）、观赏植物矮牵牛（1997）、抗病毒甜椒（1998）、抗病毒番茄（1998），以及美国孟三都公司培育的抗虫棉（1997）。 在上述转基因作物中，种植面积最大的是抗虫棉，到2000年底止，国产抗虫棉累计推广面积达37万公顷，减少农药用量80％，创造效益7.7亿元人民币 ;转基因动物：;;20世纪八九十年代：基因工程基础研究趋向成熟，应用研究初露锋芒 ; ;;DNA重组的用途 创造超自然的物种 基因在不同物质之间的转移，可创造出自然界无法产生的物种。 扩大生产有用物质 如生长素、胰岛素等转移到大肠杆菌中，大量生产，降低成本，满足需要。;用于理论研究 如用于基因功能的分析、研究，基因调控等。 用于疾病防治 基因治疗。基本步骤如下: 培养病人的细胞。 从正常人的细胞中取出正常基因。 将此正常基因转到病人的细胞中，随着病人细胞的分裂，正常基因就有机会整合到病人细胞的基因组中。 把整合后的细胞挑选出来，注入病人体内，疾病就会得到治疗或根治。;（一）DNA分子的功能;;T—A;5?; DNA分子中信息的表达;编码链（ Coding strand ） 模板链（Template strand）;转录单元（ transcription unit）：一段被转录成单链RNA的 DNA序列，它起始于启动子，结束于终止子。;启动子（Promoter）：为RNA聚合酶结合到模板上并完成初始阶段转录所提供的DNA序列称为启动子。 终止子（Terminator）：提供转录终止的序列称为终止子.上游（Upstream）：转录起始点之前的序列被称为起始点的上游。 下游（Downstream）：转录起始点之后的序列被称为起始点的下游。 ;1、原核生物启动子结构;（1）Pribnow框 一致序列： TATPuT， T80A95T45A60A50T96 -10序列是RNA聚合酶的牢固结合位点，该位点有利于双链的解开，因为多含AT对。 （2）Sextama框 一致序列： TTGACA ，T82T84G78A65C54A45。 -35序列是RNA聚合酶的初始结合位点，RNA聚合酶是靠σ亚基来识别该序列的，因此-35序列又称为RNA聚合酶识别位点。;（3）CAP位点 CAP是cAMP受体蛋白，只有CAP和启动子上的特殊位点结合后才能使-35序列和-10序列很好与RNA聚合酶结合，从而形成一个开放的起始复合物。;（1）真实终止子;（2）依赖于 r因子的转录终止 （多出现在噬菌体中）;增强子的作用特点;增强子(enhancer) 指增加同它连锁的基因转录频率的DNA序列。增强子是通过启动子来增加转录的。有效的增强子可以位于基因的5’端，也可位于基因的3’端，有的还可位于基因的内含子中。增强子的效应很明显，一般能使基因转录频率增加10～200倍，有的甚至可以高达上千倍。例如，人珠蛋白基因的表达水平在巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)增强子作用下可提高600～1 000倍。增强子的作用同增强子的取向(5’一3’或3’一5’)无关，甚至远离靶基因达几千kb也仍有增强作用。 各个基因中的增强子顺序差别较大，但有一个基本的核心顺序(core sequence)：AAAGGTGTGGGTTTGG 小鼠Ig基因结构 增强子具有组织特异性，例如免疫球蛋白基因的增强子只有在B淋巴胞内，活性才最高。除此以外，在胰岛素基因和胰凝乳蛋白酶基因的增强子中都发现了有很强的组织特异性。 ;内含子1（I1）;;;GC框：调节转录的活动。;1、利用限制性内切核酸酶酶切法直接分离目的基因;;（1）常用于核酸操作的工具酶;①限制