第八章mRNA剪接编辑PPT.ppt

mRNA剪接编辑;;真核生物基因组DNA的结构;部分人类基因中内含子序列所占的比重分析;前体mRNA--hnRNA;断裂基因 hnRNA，hnRNP，sRNA Exons (外显子): the coding sequences Introns (内含子) : the intervening sequences RNA splicing: 去除pre-mRNA的内含子形成成熟mRNA的过程. Spliceosome 剪接体 Self-splicing introns and mechanisms Alternative splicing (可变剪接): 有些pre-mRNAs 可以通过不同的剪接方式产生不同的成熟的mRNA. 60% of the human genes are spliced in this manner. ;hnRNA;;hnRNP;1. mRNA 加帽;;帽子结构 (m7GpppGp-) 7-甲基鸟核苷三磷酸:它由甲基化鸟苷酸经焦磷酸化与mRNA的5‘末端核苷酸相连，形成5’,5‘-三磷酸连接(5’,5‘-triphosphate linkage)， mRNA5’端的这种结构称为帽子(cap)。 反应空间：在mRNA的5‘-端加上m7GTP的结构。此过程发生在细胞核内，即hnRNA即可进行加帽。 加工过程:首先是在磷酸酶的作用下，将5-端的磷酸基水解，然后再加上鸟苷三磷酸，形成GpppN的结构，再对G进行甲基化。;加帽的顺序;CAP1:OCH3;帽子的类型;HN—CH3;三种5’帽结构形式;帽子结构的功能;2. Poly A 尾巴;多聚腺苷化的信号及参与的蛋白因子; 加尾反应需要的顺式元件 ; 3 ?端添加多聚腺苷酸;mRNA的多聚腺苷酸化过程;CPSF;3 ?端多聚腺苷酸尾巴的功能;3. RNA剪接(Splicing);真核生物mRNA前体的剪接;真核生物成熟mRNA形成的过程; 断裂基因发现不久，Crick（1978年）提出了一系列发人深思的问题： （1）剪切作用若是通过酶来进行的，那么这种剪接酶是怎样识别RNA上特定的位点？ （2）剪切酶有没有特异性？对不同的RNA是否需要不同的酶？ （3）切除的RNA是以线状还是环状存在的？切下的RNA的命运将如何？;Chambon等分析比较了大量结构基因的内含子切割位点，发现有2个特点： （1）内含子的两个末端并不存在同源或互补； （2）连接点具有很短的保守序列,亦称边界序列。 100种内含子的5′端都是GU；3′端都是AG，因此称为GU-AG法则（GU-AG rule），又称为Chambon法则。;5’splice site (5’剪接位点): the exon-intron boundary at the 5’ end of the intron 3’ splice site (3’剪接位点): the exon-intron boundary at the 3’ end of the intron Branch point site (分枝位点): an A close to the 3’ end of the intron, which is followed by a polypyrimidine tract (Py tract).;两个剪接位点的序列是不同的，左边的剪接位点称供体（donor）位点，右边的剪接位点称受体（acceptor）位点。 GU-AG法则（GU-AG rule）不适用于线粒体、叶绿体的内含子，也不适用于酵母的tRNA基因 ;mRNA结构特点;mRNA的剪接;细胞核中的小分子RNA称为细胞核小RNA（small nuclear RNA,snRNA); 位于细胞质中的称为细胞质小RNA(small cytoplasmicRNA,scRNA)。 在自然状态下，它们以核糖核蛋白颗粒（SnRNP和scRNP）的形式存在，俗称snurps和scyrps。 在核仁中也存在着一类小的RNA，称为核仁小RNA(small nucleolarRNA, snoRNA),它们在rRNA的加工中起作用。 snRNA参与剪接过程，并于其它蛋白一起构成一个大的颗粒复合体,称为剪接体(splicesome)。;Spliceosome(剪接体);剪接体中的snRNP 的功能; U2和U6构成催化反应的核心,U5拉近相邻的2个外显子;;真核生物mRNA前体中内含子剪接过程示意图;拼接体组装 第一次转酯：左外元、内元剪切套索 第二次转酯：exons连接、套索状内元释放 拼接体(spliceosome)解体与套索(lariat)降解同步;The simplified mechanism of nuclear mRNA precursor;Biochemical s