第一章分光光度技术.pptVIP

参考书： 1.李元宗, 常文保编著.《生化分析》, 高等教育出版社，2003 2.杨安钢，毛积芳，药力波等编.《生物化学与分子生物学实验技 术》，高等教育出版社，2001 3.汪尔康, 陈义编著.《生命分析化学》, 科学出版社，2006 考 试： 读书报告80% ,平时（提问与翻译）20% 授课人：罗云敬 单 位：北京工业大学生命科学院 第一章 分光光度技术的应用 概 论 溶液中物质含量的测定 用紫外光谱鉴定化合物 溶液对光线有选择吸收作用，由于分子结构的不同，对不同波长光的吸收能力就不同，因此每种物质都有其特定的吸收光谱。 分光光度技术就是依据Lambert-Beer定律，利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质性质及含量的技术。 第一章 分光光度技术的应用 概 论 返 回 Lambert-Beer定律 吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示，即 A=lg(1/T)=lgI0/It 透光度：透光度为透过光的强度It与入射光强度I0之比，用T表示： 即 T= It/I0 1. 吸光度和透光度 2. 朗伯定律和比尔定律 Lambert-Beer定律 朗伯定律：当溶液浓度不变时，吸光度与溶液液 层的厚度成正比，即 A=K1L 式中K1为比例系数，其值取决于入射光的波长，溶液的性质、浓度及温度；L为液层的厚度。 比尔定律：当溶液的厚度不变时，吸光度与溶液的浓度成正比，即 A=K2C 式中K1为比例系数，其值取决于入射光的波长，溶液的性质、浓度及温度；C为液层的厚度。 朗伯-比尔定律：就朗伯定律和比尔定律的合并，当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= KCL 式中比例常数K与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。C为吸光物质浓度，L为透光液层厚度。 Lambert-Beer定律 Lambert-Beer定律 3．朗伯-比尔定律： 朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。 Lambert-Beer定律 Lambert-Beer定律 4. 吸光系数 当L以cm，c以g/L为单位，上式的比例系数K称为吸光系数单位为L/(g.cm) 当L以cm，c以mol/L为单位，K称为摩尔吸光系数，用 ε表示。 ε的单位为L/mol.cm，它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。 5. 摩尔吸光系数 返 回 一. 溶液中物质含量的测定 用此法需要测定标准溶液（浓度Cs已知的溶液）和未知溶液（浓度Cx待测的溶液）的吸光度，两者进行比较而得知 Cx=Ax Cs/As 第一章 分光光度技术的应用 式中As、Ax分别为标准溶液和未知溶液的吸光度。 标准曲线法