花生粕蛋白酶解条件优化.doc

花生粕蛋白酶解条件优化 摘要：采用Alcalase碱性蛋白酶水解花生粕，设计单因素试验和正交试验考察水解时间、花生粕质量分数、酶用量、温度、pH等因素对水解度的影响，优化提取工艺。结果表明，最佳的水解条件为酶解温度60 ℃、pH 8.5，反应体系中花生粕和酶的质量分数分别为5%和7%，酶解时间4 h。在此条件下花生粕蛋白的水解度可达29.18%。关键词：花生粕；水解；碱性蛋白酶中图分类号：TS229 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）23-5460-03Optimization of Enzymatic Hydrolysis Conditions of Peanut MealSUN Su-ling，WU Hao，LI Xian，ZHANG Gan-wei（College of Life Chemical Engineering， Huanggang Normal College， Huanggang 438000， Hubei， China）Abstract： Peanut meal was hydrolyzed with alcalase alkaline protease. Effects of reaction time， mass ratio of peanut meal， dose of enzyme， reaction temperature and pH on hydrolysis degree of peanut meal protein were studied by single factor tests and orthogonal experiment. The results showed that the optimum hydrolysis conditions were as follows， reaction temperature， 60 ℃； pH 8.5； mass ratio of peanut meal， 5%； enzyme dose， 7%； and reaction time， 4 h. Under these conditions， the hydrolysis degree of peanut meal protein was 29.18%.Key words： peanut meal； hydrolysis； alkaline protease花生是中国主要的油料作物之一，经传统方式压榨或浸出制油后的花生粕主要用于动物饲料和肥料[2]。近年来研究表明，花生粕中蛋白质含量在40%以上[1]，其氨基酸分布广泛，构成比例接近于动物蛋白[3]，且其含有的小分子多肽可以由肠道直接吸收[4]，更易被人体利用。本研究以花生粕为原料，采用碱性蛋白酶对其进行水解，制备花生粕蛋白水解产品。考察了酶解温度、时间、pH、酶用量、花生粕质量分数对酶解效果的影响，并优化酶解工艺条件，以期为花生粕蛋白资源的开发利用提供一定参考依据。1 材料与方法1.1 材料与仪器1.1.1 材料与试剂 花生粕，广州竹香缘有限公司出品；福林酚试剂，Sigma公司；碱性蛋白酶，丹麦诺维信（中国）投资有限公司，酶活力为4 534 U/g；酪蛋白，北京奥博星生物技术有限责任公司；其他试剂均为分析纯。1.1.2 试验仪器 SHA-B型恒温振荡器，常州国华电器有限公司；DELTA320型pH计，梅特勒-托利多（上海）有限公司；TDL-40B型台式离心机，广州晟龙试验仪器有限公司。1.2 试验方法1.2.1 酶解试验过程 取250 mL锥形瓶5个，加入一定量制备好的花生粕浆液，用0.1 mol/L的NaOH调节pH为9.0，用蒸馏水定量到100 g，用胶头滴管滴加一定量的碱性蛋白酶，用保鲜膜将锥形瓶封口，置于已经调好温度和加水量的恒温振荡器，每隔0.5 h测定1次pH并用0.1 mol/L NaOH调节到所选定的pH，放回振荡器中继续酶解，记录NaOH的消耗量。1.2.2 单因素试验 设置单因素试验分别考察酶用量、pH、酶解温度、酶解时间和花生粕质量分数对酶解反应蛋白质水解度的影响。①酶用量。花生粕质量分数为5%，酶用量分别为3%、4%、5%、6%、7%（占反应体系的质量分数，下同），pH 9.0，在55 ℃酶解4 h。②pH。酶用量为6%，花生粕质量分数为5%，调节酶解体系pH分别为7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0，在55 ℃酶解4 h。③酶解温度。花生粕质量分数为5%，酶用量为5%，pH 9.0，分别在45、50、55、60、65 ℃酶解4 h，。④酶解时间。花生粕质量分数为5%，酶用量为5%，pH 9.0，在55 ℃分别酶解1、2、3、4、5 h。⑤花生粕