二0一五版中国药典药品微生物检查.ppt

药品微生物检查 2015年版微生物学检验中的重大修订及意义 与USP35版、EP7.0版、JP16版比较，2015年版中国药典微生物学检验体系规划收载的项目和内容已基本趋向一致，将使我国药典的微生物学检验成为一个比较完备的标准体系，其意义在于： 1、全面与国际药典标准接轨； 2、从对终产品的检验向过程控制转变。 药品微生物检查 1、无菌检查法 2、非无菌产品微生物限度检查 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 非无菌药品的微生物限度 一、无菌检查法 总则：环境、设备、人员 培养基：品种、制备、灭菌、贮存、适用性检查 稀释液、冲洗液：品种、制备、灭菌 方法适用性试验：直接接种法、薄膜过滤法 供试品的无菌检查：供试品的处理、对照试验、直接接种法、薄膜过滤法、培养及观察 结果判断 1.总则 1）对象： 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 1.总则 2）环境： 应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，（ 《9203 药品微生物实验室质量管理指导原则》:环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行） 【 10版：应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行】，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 A 级和 B 级区域的空气供给应通过终端高效空气过滤器（HEPA） 。 1.总则 2）环境： 单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》（GB/T16292、16293、16294-2010 ）现行国家标准进行洁净度确认。 隔离系统应定期按相关的要求（【15版《9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则 》】）进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 1.总则 3）人员： 【10版：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。】 15版删除。 2.培养基 2.培养基 硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养。 胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。 1）培养基的制备及培养条件 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌 制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境 若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 2.培养基 2）培养基适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。 本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 2.培养基 2）培养基适用性检查 无菌性检查: 每批培养基随机取不少于 5 支（瓶） ，置各培养基规定的温度培养 14天，应无菌生长。 灵敏度检查 菌种? 试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 菌液：浓度100cfu/ml 接种：2管+菌液，1管空白 结果判断：+菌液----生长良好 空白----无菌生长 培养基灵敏度检查 培养基灵敏度检查 培养基接种:取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种相应菌液。逐日观察结果。 4.方法适用性试验（方法验证试验） 当进行产品无菌检查法时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。 5.供试品的无菌检查 无菌检查法包括 薄膜过滤法 直接接种法 只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。 无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。 5.供试品的无菌检查 ?阳性对照? 应根据供试品特性选择阳性对照菌： 无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌； 抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌； 抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌； 抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。 阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于100C