皮质发育不良大鼠差异蛋白筛选及其致痫作用探讨.docVIP

皮质发育不良大鼠差异蛋白筛选及其致痫作用探讨 　　【摘要】目的寻找皮质发育不良大鼠脑组织（皮质和海马）与正常对照组织在不同发育阶段的差异表达蛋白质，探讨这些蛋白质在皮质发育不良所致癫痫发生机制中的作用。方法妊娠晚期（孕17 d）Sprague-Dawley大鼠腹腔注射卡莫司汀（15 mg/kg）诱导仔鼠皮质发育不良。提取新生期（出生后7 d，记作P7）及成年仔鼠（P60）新皮质及海马组织蛋白，运用双向凝胶电泳技术构建卡莫司汀诱导皮质发育不良鼠和正常鼠皮质及海马组织在新生期及成年期的蛋白质表达谱，通过比对分析筛选出差异表达的蛋白质斑点。应用MALDI-TOF-MS技术平台对差异最为显著的部分蛋白进行鉴定。结果在模型组和对照组之间共筛选出57个差异表达蛋白质斑点（P 　　【关键词】皮质发育不良；卡莫司汀；新皮质；海马；双向电泳；质谱；差异蛋白表达；癫痫 　　Comparative proteomics of rat brain in the BCNU-induced model of cortical dysplasia GUO Yi， ZHANG Man-man， DING Yao， YANG Yi， JIANG Yan， HU Jian-wen， DING Mei-ping. Department of Neurology， Second Affiliated Hospital， School of Medicine， Zhejiang University， Hangzhou 310009，China 　　Corresponding author： DING Mei-ping， Email： dingmeiping@ 　　【Abstract】ObjectiveTo screen the differential proteins in the brain （neocortex and hippocampus） between the rats with cortical dysplasia （CD） and control ones， and investigate the role of their alteration in the development of epilepsy in CD. MethodsCortical dysplasia was induced in rat pups via in utero delivery of BCNU. A two-dimensional electrophoresis （2-DE）-based approach was used to construct the expression profiles of proteins in both the neocortex and hippocampus at different age groups （postnatal day 7 and 60） and to detect proteome changes between CD rats and control ones. Following gel image analysis， protein spots that differed in abundance between CD and control rats were identified by using Matrx-assisted laser desorption/ionization （MALDI） mass spectrometry （MS） and MS/MS. ResultsA total of 57 kinds of protein were screened out（P 　　皮质发育不良（Cortical dysplasia，CD）是难治性癫痫的重要病因之一，但CD的致痫机制仍有待进一步阐释。比较蛋白质组学技术是一种新型的高通量差异蛋白筛查技术，正在???步运用到神经病学研究的各个领域。我们采用卡莫司汀诱导的CD大鼠模型，运用双向电泳技术对比分析CD大鼠和正常大鼠皮质及海马组织在不同发育时期（新生期和成年期）的蛋白质表达谱，筛选出差异表达的蛋白质斑点并应用MALDI-TOF-MS技术平台进行鉴定，以期进一步探讨皮质发育不良癫痫易感性的发生机制并发现新的治疗靶点。 　　1材料与方法 　　1.1动物模型的建立与实验分组 　　健康怀孕Sprague-Dawley大鼠5只由浙江中医药大学实验动物中心提供，孕17 d（Embryonic day 17， E17），体质量270～320 g。于E17随机选取3只孕鼠腹腔内注射卡莫司汀（天津金耀制药厂），给药剂量为15 mg/kg，E22仔