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运动提高糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达信号机制 　　摘 要：为研究运动激活的CaMK II对糖尿病大鼠骨骼肌MEF2和GLUT4结合活性及GLUT4基因表达量的调节作用，以了解运动提高糖尿病大鼠GLUT4基因表达的可能机制。将健康SD大鼠100只，40只作为正常对照，其余60只建立糖尿病大鼠模型，建模成功35只。正常对照和糖尿病大鼠再按体重各自随机分为5组：安静对照组、一次性运动组、一次性运动+KN93组、耐力训练组、耐力训练+KN93组，共10组。跑台速度20 m/min，运动时间1 h。一次性运动组大鼠1次运动后3 h取材。耐力训练组采用同样跑台速度和运动时间，训练1周，并于最后1次训练后12 h取材。结果得到，糖尿病大鼠耐力训练组，骨骼肌细胞核内MEF2和GLUT4的结合活性及骨骼肌GLUT4基因表达量虽然均显著低于正常对照大鼠耐力训练组，但与糖尿病大鼠安静对照组相比均显著升高；耐力训练+KN93组，骨骼肌细胞核内MEF2和GLUT4的结合活性与安静对照组相比差异没有显著性，但骨骼肌GLUT4基因表达量与安静对照组相比却显著升高。结果显示：虽然运动通过激活糖尿病大鼠骨骼肌CAMK II而提高其骨骼肌细胞核内MEF2和GLUT4的结合活性，虽然MEF2和GLUT4的结合活性参与调解了正常大鼠骨骼肌GLUT4基因表达，但并不是影响糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的唯一因素。 　　关 键 词：运动生物化学；钙/钙调素依赖性蛋白激酶II；肌细胞增强因子2；葡萄糖运载体4；糖尿病大鼠 　　中图分类号：G804.7 文献标志码：A 文章编号：1006-7116（2013）02-0124-06 　　大量研究表明运动可以提高骨骼肌葡萄糖运载体4（glucose transporter 4，GLUT4）的表达[1-3]，这对治疗以胰岛素抵抗为主要病因的糖尿病有重要作用[4-5]，但机制尚不清楚。凝胶迁移（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）实验，显示了GLUT4启动子区域存在肌细胞增强因子2（myocyte enhancer factor 2，MEF2）的结合位点[6]。Thai等[7]的研究进一步发现，糖尿病大鼠骨骼肌MEF2和GLUT4 结合活性及GLUT4mRNA表达量均显著低于正常大鼠，而用胰岛素刺激糖尿病大鼠骨骼肌细胞之后，发现MEF2和GLUT4 结合活性及GLUT4表达量均恢复到正常大鼠水平，提示了MEF2和GLUT4结合活性的变化是影响糖尿病大鼠GLUT4表达失常的重要环节[8]。虽然我们以往的研究结果也显示了运动通过提高骨骼肌MEF2和GLUT4结合活性而提高GLUT4基因表达[10]，但此机制未在糖尿病患者中得到证实。Mukwevho[9]的研究发现利用细胞钙离子调节子Caffeine 孵育激活C2C12肌细胞钙/钙调素依赖性蛋白激酶II（calcium-calmodulin depen-dent protein kinase II，CAMKII），可以引起肌细胞核内MEF2和GLUT4结合活性显著增加，且这种增加伴随着GLUT4 基因和蛋白的表达量的提高。运动能够激活CAMKII[11]，提示了运动可能通过激活CaMKII而提高糖尿病大鼠MEF2和GLUT4结合活性和GLUT4表达的增加。值得注意的是，离体研究结果并不一定能真实反映在体的真实状况。因此本实验通过KN93（CaMKⅡ的特异性抑制剂）抑制运动对糖尿病大鼠骨骼肌CAMK II的激活作用，研究在体运动情况下CAMK II对糖尿病大鼠MEF2和GLUT4结合活性和GLUT4表达的调节作用。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验动物 　　本实验以100只12～14周龄，健康清洁级SD大鼠为研究对象，河南省实验动物中心提供。试验期间，室内温度保持在20～25 ℃，相对湿度保持在50%～70%，每天光照12 h。正常饲养的1周时间内所有大鼠自由进食（普通饲料）和饮水。 　　1.2 糖尿病大鼠模型的建立 　　SD大鼠适应性喂养1周后，随即选出40只作为正常对照，继续以普通饲料饲养。其余60只拟建立糖尿病大鼠模型。方法如下[12]：以高质饲料（碳水化合物和脂肪各占41%，蛋白质占18%，均为质量比）饲养4周，并禁食12 h（晚上）后，腹腔下注射链脲佐菌素（streptozotocin，STE），注射质量分数为30 mg/kg（柠檬酸钠-柠檬酸盐缓冲液配置，pH=4.2），STE购于Sigma公司。注射后继续给予高脂饲料，自由饮水。72 h后测定空腹血糖浓度（测血糖浓度之前禁食12 h），凡血糖浓度大于6.7 mmol/L者视为造模成功，成功共35只。 　　1.3 运动方案和取材 　　实验安排在