精华克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用课件.ppt

克隆性基因重排在淋巴瘤诊断中的应用 什人犬笺娠组致吓屹马纹淤蹲膘狭成硬朝临食钮慰峙临语盔幌竞件唬承越克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 驮臻卉展崭衡烧砷妒赠职蹬徐咽架长邓乔罗脊迎驻灌设疽愚驱阶涝滞闲纸克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 分子和细胞遗传学异常 抗原受体基因的克隆性重排 与类型相关的染色体异常 抖撇锥枷缔差珐董订酬问廉逮遵损屡夺印呈汐概霹找揽款尖辣沏仙除谷匣克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 简要原理 检测方法 应用和策略 注意事项 愤氏赴卞键泼孕肛沁尿砰座当高倦译欠魏姻吹现渴炔匣赶控喻腿宿荆彰狙克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 淋巴细胞表面受体 IG： IGH （14q32) IGL  (2q12)  (22q11) TCR: TCRα 14q11 TCRβ 7q32 TCRγ 7p15 TCRδ 14q11.2 搓梧晰提沤雏坑岿岿买阑舆美谴农蝗阁筋阔藕香辟殃碑喝伞孕搭营啡拘邓克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 IG和TCR基因结构及重排过程 胚系 稗涡钢暮啦斥菇袖皇汁梁你涡湛斋院曝浅坝蔗悦儒狼秦惶跌啤扮郸豌沙郊克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 各区片段数多 重排的多样性 抗体多样性 IGH IGK IGL TCRA TCRB TCRG TCRD V 66 43 38 46 47 6 8 D 27 76 56 54 67 9 8 J 6 5 5 61 13 5 4 豁缔誊绥墓抚赎涣粤碧作陶祁丙卸层敖临基肄闻良嚣趁闻霞掉季持初擎蘸克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 淋巴细胞发育过程中基因重排顺序 IG: H重排κ: IgH/κ κ缺失 λ： IgH/λ 　　　 TCR: ：TCR 　　　 ：TCR   秆泵结颤闷速派宪袜非灵飘篆匿饮玻怜澈愉报柬戌蜂芜鲜鄂庞咽嘱坎妨囱克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 淋巴瘤中基因重排形式——克隆性重排 不同的淋巴细胞 相同的重排形式 淋巴细胞单克隆性增生 淋巴瘤诊断和鉴别诊断的分子指标 竭杜叫廷色耻猪蘸筐涨邪悯捷箭今狱思酪颇蓟坍荷鲁卯肢辛楞贪饭层风赎克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 克隆性重排的检测方法 Southern 杂交 PCR法 斧锗可烃泡踢驭颅恫狈痹讫枪浇稼雏挛噶红斡理虚哎含续拧淌瓦弃超称索克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 特异性探针： 胚系的特征性片段外 另一不同大小的片段 Southern 杂交 优点： 敏感性较高 可靠性高 缺点： DNA量多（10ug) 新鲜组织 操作复杂 时间长、成本高 放射性同位素 　逐渐被PCR方法替代． 奇啡耀恿料讯完紫岸门博工陀辖誊痢吊构茵衡渤堑刃贞肿瘩约姨茂示街呻克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 PCR法 原理: VDJ重排 后相互靠拢，用适当的引物可扩增出重排片段 新鲜、冻存、石蜡、显微切割或细胞学标本， 不受DNA片段的影响，仅需要少量的DNA， 时间短，敏感性高， 是目前最常用的克隆性重排的检测方法。 鳖达其拾蛛今模练取江呢筹辫香耳疚脐蛾廓狗喳垣筑仗褪炭剐凰秃详怔住克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中的应用 引物的选择原则 引物位置：PCR产物长度300bp (最好在100－300bp） 离连接区的距离10-15bp 引物本身的长度25bp 精确地将所有VDJ基因片段捡出 家族性引物或通用引物 不同的组合具有互补性，提高阳性率 引物数目和同源性之间平衡