针灸对卵巢早衰大鼠卵巢内分泌功能影实验研究.docVIP

针灸对卵巢早衰大鼠卵巢内分泌功能影实验研究 　　摘要：目的：运用针灸方法对卵巢早衰大鼠模型进行干预，探索其对卵巢内分泌功能的影响。方法：60只大鼠随机分为正常组和造模组，造模成功后造模组随机分为模型组、西药组、针灸组，正常组和模型正常饮食、饮水，西药组给予乙烯雌酚灌胃，针灸组给予相关的针灸，连续治疗15天后，采用酶联免疫吸附法检测血清雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）、及黄体生成素（LH）。结果：西药组及针灸组治疗后血清E2含量均明显升高，但西药组E2含量稍高于针灸组（P 　　关键词：卵巢早衰；针灸；FSH、LH、E2 　　卵巢早衰（prematureovarianfailure，POF）是一类严重影响妇女生殖健康及身心健康的疾病。患者40岁前即出现闭经，并常伴烘热、汗出、烦躁等低雌激素症状，常伴随其他内分泌自身免疫疾患。POF发病率为1%～3%，在原发性闭经患者中患病率为10%～28%，占继发性闭经的4%～18%[1-3]。本病由于病因不明，治疗颇为棘手，西医治疗主要使用激素替代疗法，中医治疗多以口服补肾中药为主，目前尚无比较有效的治疗措施。针灸治疗具有副作用小、操作方便等诸多的优点，因此加强在这方面的研究，对于提高患者的生活质量有着积极的意义。 　　1主要实验材料 　　1.1 实验动物 老年Wistar大鼠60只（11-12月龄），雌性，体重300±20g。由贵阳医学院实验动物中心提供。合格证号：SCXK（黔）2002-0001。 　　1.2药品与试剂 ①氧化可的松，10mg/ml，由成都利华制药厂生产（生产批号，0501023）。②FSU、E2、LH试剂盒，由深圳拉尔文生物有限公司提供。③乙烯雌酚，由天津力生制药有限公司生产（批号：0409016）。④95%酒精、75%酒精、哈氏苏木紫溶液、二甲苯溶液、载破片等。 　　1.3 仪器与设备 ①离心机80-2离心沉淀器（上海手术器厂产品）。②KDC-2044低速冷冻离心机（中国科技大学科技实业总公司中佳光电仪器公司产品）。③GC-1200γ放射免疫计数器（科大创新股份有限公司中佳分公司产品）；IFCX-0128型低温冰箱（MadeinItaly）。④光学显微镜（上海光学仪器厂）。⑤华佗牌不锈钢针灸针（0.5寸，苏州医疗用品厂有限公司）。⑥华佗牌SDZ-II型电子针疗仪（苏州医疗用品CE-0123有限公???）。⑦试管、EP管、组织剪、眼科剪、眼科镊、注射器、载玻片等。 　　2实验方法 　　2.1模型的制作 选用老年Wistar大鼠60只（11-12月龄），雌性，体重300±20g。通过阴道脱落细胞涂片法，选出动情周期正常的大鼠共计55只（大鼠正常动情周期为4-5天）。按抽签法随机分为正常组（16只）和造模组（39只），造模组综合文献[4]、[5]、[6]进行动物造模，每日上午9点定时予以氢化可的松20mg/kg，大鼠后腿肌肉注射，每日1次，并每日下午2点定时对模型组进行阴道上皮脱落细胞涂片，连续14天后随机选出造模组和正常组大鼠各6只进行外周血雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）及黄体生成素（LH）的测定，并卵巢病理组织检查。模型成功标志：大鼠动情周期紊乱、外周血E2降低、FSH和LH升高[7]、[8]并卵巢切片中未见成熟卵泡和次级卵泡[3]。 　　2.2实验分组 造模成功后，造模组按随机数字表随机分为3组，即模型组（11只）、乙烯雌酚组（11只）、针灸组（11只）。 　　2.3治疗方法 ①正常组正常饮食、饮水，每天抓拿一次。②模型组：同正常组。③乙烯雌酚组：每日上午8点定时给予乙烯雌酚0.000018mg/kg-0.000045mg/kg灌胃（根据动物体表面积比率换算等效剂量法计算[8]），连续治疗15天。④针灸组：将大鼠仰卧固定于木板上，根据《实验针灸学》[8]和《实用动物针灸手册》[9]，选取大鼠关元穴（脐下约25mm处）和双侧水道穴（关元穴旁约2mm处），经准确定位、常规消毒后，用直径为0.22mm，长0.5寸毫针，刺入3mm左右，针刺水道穴时，针尖方向朝向卵巢方向，然后接华佗牌SDZ-II型电子针疗仪，疏密波，20-40HZ，电流强度以使局部肌肉抽动为度，留针15分钟，电针后用艾条艾灸关元、水道等穴，每日定时针灸1次，连续治疗15天。 　　2.4观察指标：①动物一般情况观察大鼠精神活动状况、皮毛、体重变化及死亡情况。②大鼠外周血FSH、LH、E2的测定治疗15天后，于第16天上午10点同时对各组大鼠进行股动脉取血，3ml（ED-TA）/只，3000r/min离心10min吸出血清，-20℃保存，以备检测FSH、LH、E2，采用放免法（ELISA）测定，按照试剂盒说明书进行操作。 　　2.5统计学处理：所得数据用SPSS16.0统计软件进行