高效液相色谱法测定马尿酸乌洛托品片有关物质.docVIP

高效液相色谱法测定马尿酸乌洛托品片有关物质 　　[摘要] 目的 应用高效液相色谱法测定马尿酸乌洛托品片的有关物质。 方法 采用C18色谱柱（4.6mm×250mm，5?m），甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶25∶35）为流动相，流速：0.9mL/min，检测波长：217nm。 结果 在选定的色谱条件下，马尿酸乌洛托品与有关物质分离完全.最低检测限为30ng，精密度良好（RSD=0.78%）。 结论 该方法简便、准确、专属性好、灵敏度高，可用于马尿酸乌洛托品片的有关物质测定。 　　[关键词] 马尿酸乌洛托品片；有关物质；高效液相色谱法 　　[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）18-118-03 　　马尿酸乌洛托品片主要成份为马尿酸乌洛托品，其化学名称为：1，3，5，7-四氮-三环[3，3，1，1]癸烷-单-N-苯甲酰甘氨酸盐。该片剂为下泌尿道感染的预防用药，适用于泌尿道术后及膀胱镜检查后留置导尿管者[1-2]。我们采用高效液相色谱法测定，优化了液相条件，建立了马尿酸乌洛托品片有关物质的测定方法，本法简便准确、专属性强，可用于马尿酸乌洛托品片的检测及质量控制。此法可靠、准确、方便、快速。 　　1 材料 　　日本岛津LC-10ATVP型高效液相色谱仪；SPD-1OAVP紫外可见检测器；ANASTAR色谱数据工作站；Mettler ToledoMx5型电子天平（瑞士梅特勒一托利多公司）；马尿酸乌洛托品对照品（批号为MKBC4167V）美国Sigma公司；马尿酸乌洛托品片（湖南明瑞制药有限公司，国药准字批号：130219，130327，130411）；甲醇、乙腈（色谱纯，北京益利精细化学品有限公司）；磷酸（分析纯，广州化学试剂二厂）。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件及系统适用性[3-11] 　　C18色谱柱（4.6mm×250mm，5?m）；甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶25∶35）为流动相，流速：0.9mL/min，检测波长：217nm。理论塔板数按马尿酸乌洛托品峰计算应不低于 　　3000。马尿酸乌洛托品峰与其他相邻杂质峰之间的分离度应符合要求。 　　2.2 检测波长的选择 　　取马尿酸乌洛托品片适量，用流动相稀释后，用普析通用TU-1800SPC型紫外可见分光光度仪，按紫外分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA）[1]，在150～300nm波长范围内扫描，结果在217nm波长处有最??吸收，故确定检测波长定为217nm。 　　2.3 供试品溶液及预试溶液的制备 　　取马尿酸乌洛托品片适量，研细，精密称定，加流动相溶解并稀释成每1毫升含马尿酸乌洛托品50μg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释成每1毫升含马尿酸乌洛托品10μg的溶液，作为预试溶液。 　　2.4 辅料干扰试验 　　按马尿酸乌洛托品片处方制成缺马尿酸乌洛托品的空白辅料溶液，分别取适量空白辅料溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果空白辅料溶液在保留时间1.6min有吸收峰；而供试品溶液主峰保留时间为6.9min，其他杂质峰保留时间为4.2min，能与主峰有效分离，实验结果表明，辅料不干扰该品种有关物质的控制。见图1。 　　2.5 检测限考察 　　取空白基线一段，测量其噪音峰高，再将供试品溶液稀释成适当浓度，取10μL进行测定，使其主药峰高为噪音峰高的3倍，以其浓度计算最低检测量。结果表明：其检测限为30ng。 　　A.空白辅料溶液；B.供试品溶液； 　　1.辅料峰；2.主药杂质峰；3.主药主峰 　　图1 空白辅料溶液与供试品溶液HPLC图谱 　　2.6 方法专属性考察 　　为考察马尿酸乌洛托品片可能的降解产物及色谱条件的选择性，采用氧化、高???、光照、酸、碱对马尿酸乌洛托品片进行破坏性降解处理。 　　取马尿酸乌洛托品片适量，置研钵中研细，称取细粉适量（约相当于马尿酸乌洛托品10mg），置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为破坏实验贮液（A）。 　　精密量取破坏实验贮液，平行6份，分别经以下条件处理：（1）精密量取A 5mL，置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为破坏对照溶液；（2）精密量取A 5mL，置10mL容量瓶中，加30%过氧化氢2mL，放置1h，加流动相至刻度；（3）精密量取A 5mL，置10mL容量瓶中，置于100℃下加热破坏2h，放冷，加流动相至刻度；（4）取A适量，置于4000Lx的强光下照射2h，精密量取5mL，置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度；（5）精密量取A 5mL，置10mL容量瓶中，加入2mol/mL的盐酸溶液2mL，放置2h，用氢氧化