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细胞分子免疫学间接免疫荧法检测抗核抗体
间接免疫荧光法检测抗核抗体 细胞与分子免疫学技术 实验原理 ANA (Antinuclear Antibodies) 是针对细胞核成分的自身抗体 间接免疫荧光法检测ANA是初步筛选实验 ANA阳性提示患有自身免疫性疾病SLE和其他不同类型的风湿病，抗体滴度≧1:100 Hep-2细胞为抗原基质，产生的荧光核型与靶抗原的分布部位有关 抗原片组合：Hep-2细胞+灵长类肝脏冰冻切片 ANA没有器官和种系的特异 (Homogeneous nucleoplasmic) (在SLE中阳性率40%-70%) (Coarse speckled nucleoplasmic) Hep-2 (Fine speckled nucleoplasmic) 核仁型（Nucleolar pattern） 细胞核内部呈现大团块或大颗粒状染色，通常其数目不超过6个。核仁型抗体与系统性硬皮病、多发性肌炎/硬皮病重叠综合症、 SLE，以及系统性风湿病相关 覆有Hep-2细胞和灵长类肝组织复合片的生物薄片 FITC-羊抗人IgG 阳性质控 PBS-Tween缓冲液 间接免疫荧光法检测ANA试剂盒 25 μl per field 孵育 30min PBS-Tween冲洗1 s 5 min 浸泡 抗原片背面滤纸吸干 10X?100X?1000X PBS/Tween20 PBS 原液、1:10、1:100、1:1000 4?L 标本 + 36 ?LPBS-Tween 清水冲洗加样板，滤纸擦干 加样板 PBS/Tween20 FITC-羊抗人 IgG: 20 μl per field Glycerol/PBS Wash PBS-Tween冲洗1 s 5 min 浸泡 抗原片背面滤纸吸干 孵育 30min 清水冲洗加样板，滤纸擦干 生物薄片上滴加1滴磷酸盐缓冲甘油 加样板 北京欧蒙生物技术有限公司 抗核抗体谱（IgG）检测试剂盒 * 抗SS-B(La)的靶抗原为RNA多聚酶Ⅲ的辅助蛋白(48×103)。La蛋白的分子生物学性质已被阐明。RNA多聚酶的转录单位还包括核糖核酸蛋白颗粒组分小hY-RNAs，后者也被抗SS-A(Ro)识别。因此，至少从目前看来，Ro蛋白和La蛋白是细胞内的相同成分，或核糖核酸蛋白颗粒的部分相同成分。这可能就是即使Ro和La不存在可能发生交叉反应的同种序列，通常仍能在病人血清中同时查及的原因。 * 抗SS-B(La)的靶抗原为RNA多聚酶Ⅲ的辅助蛋白(48×103)。La蛋白的分子生物学性质已被阐明。RNA多聚酶的转录单位还包括核糖核酸蛋白颗粒组分小hY-RNAs，后者也被抗SS-A(Ro)识别。因此，至少从目前看来，Ro蛋白和La蛋白是细胞内的相同成分，或核糖核酸蛋白颗粒的部分相同成分。这可能就是即使Ro和La不存在可能发生交叉反应的同种序列，通常仍能在病人血清中同时查及的原因。
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