分子生物实验常用技术参数资料 整理1.0版.docVIP

分子生物实验室常用技术参数资料 　重量换算 　　1μg=10-6g　　　　　 1ng=10-9g 　　1pg=10-12g 　　　　　 1fg=10-15g TE（用于悬浮和贮存DNA） 　成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L Tris－HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8ml 50×TAE （Tris-乙酸）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 5×TBE （Tris-硼酸）缓冲液成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40％聚蔗糖水 1.5ml 1％溴酚蓝1.5ml 1％二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g 补足到10ml ．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液 　　【配制方法】 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节　溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。．1mol/L Tris-HCl溶液 　　【配制方法】在900ml水中溶解121.9g Tris碱，再根据所要求的pH（25℃下）按下表加一定量的浓盐酸，用水调整终体积至1L。 　　pH　　　7.4　 7.6 8.0 　　HCl　　 70ml 　60ml 42ml 　　应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 　　【注意】 　　如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。 　　尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。 　　Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。各种pH值的Tris缓冲液的配制 各种pH值的Tris缓冲液的配制　 所需pH值（25℃） 0.1mol/L HCl的体积 7．1 45．7 7．2 44．7 7．3 43．4 7．4 42．0 7．5 40．3 7．6 38．5 7．7 36．6 7．8 34．5 7．9 32．0 8．0 29．2 8.1 26.2 8.2 22.9 8.3 19.9 8.4 17.2 8.5 14.7 8.6 12.4 8.7 10.3 8.8 8.5 8.9 7.0 　　某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制： 将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml 　　温度对50mmol/L Tris·HCl液pH值的影响 4℃ 25℃ 37℃ 8．1 7．5 7．2 8．2 7．6 7．3 8．3 7．7 7．4 8．4 7．8 7．5 8．5 7．9 7．6 8．6 8．0 7．7 8．7 8．1 7．8 8．8 8．2 7．9 8．9 8．3 8．0 9．0 8．4 8．1 9．1 8．5 8．2 9．2 8．6 8．3 9．3 8．7 8．4 9．4 8．8 8．5 二、常用贮存液1．30%丙烯酰胺溶液 　　【配制方法】 　　29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解，补加水至终体积为100ml。查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4度。 　　【注意】 　　丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。 在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。 ．0.1