中药材分子鉴别现场运用策略与实践.docVIP

中药材分子鉴别现场运用策略与实践 　　[摘要] 在中药材实际生产与贸易交流中，中药材准确、快速鉴别一直是比较困难的工作。分子鉴别被认为是传统鉴别技术的有益补充，但目前分子鉴别方法仅止于实验室阶段，难以实现在产地、药市、药房等进行现场鉴别，极大的限制了其使用的范围和推广程度。其中，中药材DNA快速提取技术和DNA标记的快速检测技术是实现分子鉴别现场运用的两大瓶颈和关键问题。该研究开发了一套中药材分子鉴别现场运用模块系统，包括药材DNA快速提取模块、DNA标记检测模块和保障模块，并配备了相应的自主开发试剂盒、仪器装备。运用这套系统对金银花进行现场鉴别，可在40～60 min完成，且仪器装置简单、易于操作，为传统中药现场鉴别手段的有益补充。 　　[关键词] 现场鉴别；分子鉴定；药材 　　[收稿日期] 2012-12-03 　　[基金项目] 北京市科技专项“道地中药材功能基因组研究北京市重点实验室2012年阶梯计划项目” 　　[通信作者] *黄璐琦，E-mail：huangluqi@263.net 中药材基原真伪鉴别是中药学研究领域中的重要研究方向和首要问题，中药材是否“正本清源”直接影响到用药安全。由于中药材基原具有多样性、复杂性的特点，易受到物种延续性、变异性、地域性和复杂性等因素的影响。因此，对中药材基原鉴别可以从源头上控制中药的质量，对保障中药生产和中药产业的健康发展起到举足轻重的作用[1]。利用分子生物学技术依据遗传物质DNA在不同生物个体的差异鉴别生物物种，可为中药材品种鉴别提供依据[2]。近20年间，以PCR技术为基础的中药分子鉴别技术因其不受外界环境的影响、具有较好的客观性，逐渐被业内认可。其中乌梢蛇、蕲蛇分子鉴别方法被《中国药典》（2010年版）收载。笔者认为，对中药鉴定技术的需求不仅仅局限于实验室应用，未来将更主要应用于广泛的实际生产与贸易交流环节。随着分子鉴别技术的发展，构建中药材分子鉴别现场运用模块系统有望实现在产地、药市、药房等进行药材现场分子鉴别，将对中药鉴定学科和中药产业的可持续发展将起到推动作用。 　　1 中药材分子鉴别现场运用的意义和需求 　　1.1 分子鉴别现场运用是常规检测手段的延伸 　　对中药材真伪品的检测通常采用眼看、手摸、嘴尝、鼻闻等方法，正确辨别药材真伪品需要较高的专业技能和长时间经验积累。目前能够熟练掌握这一技能的人才缺乏，且面对种类繁多的中药材，鉴定人员存在主观判断力差异，也影响鉴定的结果。分子鉴别现场运用可以在短时间内实现对药材真伪品的检测，且不受药材外观形态、个体大小和完整性的影响，有利于提高中药材质量监管的科学性和管理效力。 　　1.2 高通量检测是分子鉴别现场运用的重要优势 　　在药材抽检的过程中，按照中药材或中药饮片抽验工作程序，样品数量巨大。发展高通量检测技术是缩短检测时间、减少工作量、节约检测成本的重要途径。 　　1.3 仪器设备简单、成本低廉将有利于分子鉴别现场运用的推广 　　近年来，许多学者利用分子生物学技术对中药鉴定方法进行了广泛的研究，并取得了丰富的成果。如杨俊宝等[3]筛选获得2个RAPD引物，可以用于鉴别半夏和掌叶半夏。蒋超等[4]利用EST-SSR技术对金银花、山银花进行了鉴别方法的研究。DNA条形码技术也被认为是中药鉴别的重要方法之一[5]。荆志伟等[6]用基因芯片技术对中药石斛的不同种属进行了鉴别研究，将16个不同种属石斛的ITS序列固定在玻片上制作了基因芯片，用于其中5种石斛的鉴定。然而这些方法目前仅止于实验室阶段，由于其操作繁琐、检测需要大型仪器、耗时长、成本高，难以实现在产地、药市、药房等进行现场鉴别，极大的限制了分子鉴别技术的使用范围和推广程度。 　　在日常监督工作中对于廉价药材的检测或者对技术较复杂、操作过程繁琐的检测指标进行大批量样品筛检时，往往面临时间和经费的双重困难。利用分子鉴别现场运用系统有望有效解决这一难题。 　　1.4 在有毒中药、珍稀濒危药材、贵重药材鉴别方面具有广阔的发展潜力 　　分子鉴别现场运用系统，对药材需求量少，仅需0.1 g药材就可以进行鉴别反应。因此，对于一些价格昂贵或珍稀濒危的药材，该系统具有更广阔的发展潜力。 　　1.5 中药材快速检测工作模式的探讨 　　将快速检测车及现场快速检测仪器作为主要工作平台，依托快检实验室开展工作。形成涵盖现场快速检测的药材分子快速检测模式。现场采集的样本可以通过快速检测仪器获得结果，如需实验室检测或需进一步确证，则将样品送回快检实验室获得检测结果。 　　2 中药材分子鉴别现场运用存在的困难及解决方案 　　2.1 中药材DNA快速提取 　　CTAB法、SDS法等[7]是中药材DNA提取的常用方法，在这些方法中常使用65 ℃水浴使细胞裂解、蛋白质变