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色谱法概论 课程内容 一、色谱法概论 二、经典液相色谱法（ LC ） 三、气相色谱法（GC） 四、高效液相色谱法（HPLC） 五、毛细管电泳（CE） 邮箱：jhq@sdjutcm.edu.cn 密码：405405 色谱法概论 定义：色谱法是一种物理或物理化学分离分析方法。是一种分离技术。 特点：适宜分离多组分的试样，效率高、应用广。 原理：利用各物质（组分）在两相（固定相、流动相）中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复的分配来达到分离的目的。 完成这种分离分析的仪器为色谱仪。K=Cs/Cm 一、色谱法的起源和发展 1906年，俄国植物学家茨维特首次提出色谱法。 茨维特研究植物色素时使用的色谱原型装置，如右图。在一根玻璃管底部塞上棉花，管内填入碳酸钙粉末，石油醚萃取液倒在碳酸钙上面，用石油醚冲洗。结果几种色素在管内展开形成5个色带。 1931年库恩利用茨维特的色谱法分离了60多种胡萝卜素，；并从蛋黄只能够分离出叶黄素，从此吸附色谱法才迅速为各国所注意。 1940年，Martin 和 Synge （英）提出液－液分配色谱法； 1952年， James和 Martin 发表了从理论到实践比较完整的气液色谱方法因而获得了1952年的诺贝尔化学奖。 1957年，Golay开创了毛细管柱气相色谱； 20世纪60年代，高效液相色谱； 20世纪80年代初，超临界流体色谱； 20世纪80年代末，毛细管电泳 在分析化学领域，色谱法是一个相对年轻的分支学科。早期的色谱技术只是一种分离技术而已，与萃取、蒸馏等分离技术不同的是其分离效率高得多。当这种高效的分离技术与各种灵敏的检测技术结合在一起后，才使得色谱技术成为最重要的一种分析方法，几乎可以分析所有已知物质，在所有学科领域都得到了广泛的应用。 高效液相系统 二、色谱法的几个重要术语* 1. 色谱柱（column） 在茨威特实验中,装有CaCO3的玻璃管,即是一根色谱柱(是指包括CaCO3的管). 2. 固定相 (stationary phase) 在柱内固定不动的一相称固定相,如CaCO3. 3. 流动相(mobile phase) 在柱内不断流动的一相,称流动相,如石油醚. 4. 被分离组分（样品） 如色素 5. 洗脱 将流动相连续不断地加入色谱柱,使之通过固定相,把被分离的物质冲洗出柱的过程,叫洗脱。 洗脱是色谱过程中必要而又重要的步骤—选择适宜的流动相、固定相实现分离。 6. 洗脱剂 在洗脱过程中加入色谱柱的流动相即洗脱剂。 7. 洗脱液(流出液) 流出色谱柱的溶液,即洗脱液。 二、色谱法分类 （一）按流动相和固定相所处状态分类： 气相色谱（GC）：气体作为流动相 液相色谱（LC）：液体作为流动相 超临界流体色谱（SFC）：以超临界流体作为流动相 （二）按分离机制分类： 1. 吸附色谱：以吸附剂作固定相，有机溶剂作为流动相，利用样品中不同组分在吸附剂上吸附能力的差别，而进行分离的方法。 2. 分配色谱：根据组分在固定液与流动相中溶解度不同而分离。 3.空间排阻色谱：利用大小不同的分子在固定相（凝胶）与流动相中的选择渗透而达到分离的方法。 4.离子交换色谱：利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而进行分离的方法。 5.键合相色谱、毛细管电泳等 （三）按操作形式分类： 1. 柱色谱：将固定相装在金属或玻璃色谱柱内或涂渍在柱内壁上而进行分离的方法。 2. 平面色谱： 1） 纸色谱：以滤纸为载体，以纸纤维吸附的水分为固定相，样品点在纸条一端，用流动相展开进行分离和分析的色谱法。 2） 薄层色谱：将吸附剂均匀地铺在玻璃板上形成薄层，分离方法同纸色谱。 (四） 按使用目的分类 分析用：实验室、便携式；分析样品量少 制备用：实验室用、工业用；纯物质制备，如高纯试剂、蛋白质、手性药物拆分和纯化 流程用：工业生产流程在线连续使用 一、色谱分离依据简介 分离任何物质都要依据它们性质的差异。 例如蒸馏是利用沸点的差异，沉淀、结晶是利用溶解度不同。 在色谱当中，是利用物质在两相中溶解、亲和、吸附或其它亲和作用力的不同，使混合物中各组分达到了分离。 例如：分离含A、B两种组分的混合溶液。 当组分进入柱后，由于组分与固定相间的亲合力，就要被固定相所滞留，即固定相对组分有滞留作用（保留作用），组分的性质不同，则固定相对不同组分的滞留能力（保留能力）不同。 组分与固定相之间的亲合力越大，则固定相对该组分的滞留越强烈。它随流动相移动的速度就较慢；反之，组分在柱内的移动速度快；从而造成了A、B在柱内的差速迁移，即移动速度不同。 当经过一段距离后，速度的差异造成A、B组分先后出柱，得到分离。这就是色