山羊痘病毒某些生物学特性及其主要结构蛋白p32基因的研究-动物学专业论文.docx

2.1 基于 P32 基因 PCR 方法的建立 542.2 基于 ITR 基因 PCR 方法的建立 572.3 P32 基因和 ITR 基因的序列分析结果 603 讨论61第五章 山羊痘病毒 TAQMAN-MGB 实时定量荧光 PCR 鉴定方法的建立与应用631 材料与方法641.1 材料 641.2 方法 652 结果682.1 引物设计与合成682.2 标准质粒的构建692.3 FQ-PCR 反应体系的优化 692.4 FQ-PCR 的重复性检验 702.5 标准曲线的构建702.7 FQ-PCR 的应用 723 讨论74第六章 山羊痘人工感染试验 771材料与方法 781.1 材料 781.2 方法 782结 果792.1 GPV 细胞培养物的 TCID50 值的确定792.2 动物模型的流行病学结果 792.3 实验羊的临床剖检变化 802.4 感染羊组织病料中 GPV 的普通 PCR 检测812.5 病羊组织中 GPV 的 FQ-PCR 检测结果812.6 病变材料中 GPV 的细胞分离鉴定823讨论83第二部分P32 基因的研究85第七章 GPV P32 基因的克隆测序及序列分析851 材料和方法861.1 材料 861.2 方法 872 结果902.1 PCR 扩增结果912.2 目的 DNA 的克隆912.3 重组质粒的 PCR 鉴定912.4 重组质粒的酶切鉴定 912.5 测序序列核苷酸和氨基酸同源性分析 922.6 测序序列的系统进化树分析 933 讨论93 第八章 GPV P32 基因的生物信息学分析 95 1 材料与方法961.1 材料 961.2 方法 962 结果962.1 GPV P32 基因的核苷酸同源性分析结果 962.2 P32 蛋白的跨膜结构预测 962.3 P32 蛋白的亲水性分析 972.4 P32 蛋白抗原指数、骨架柔韧性、表面可及性预测 972.5 P32 蛋白二级结构的预测 982.6 P32 蛋白 B 细胞抗原表位的综合评价 993讨论99 第九章 GPV P32 基因的原核表达 1031 材料与方法 1041.1 材料 1041.2 方法 1062 结果 1112.1 P32 基因的 PCR 扩增结果 1112.2 重组表达质粒的 PCR 鉴定 1112.3 重组质粒的酶切鉴定 1122.4 目的蛋白的表达结果 113表达产物的 Western-Blotting 分析结果 1153 讨论 115第十章 GPV P32 基因的真核表达1171 材料与方法 1181.1 材料1181.2 方法 1202 结果1262.1 目的基因的 PCR 扩增结果1262.2 阳性重组质粒的鉴定 1272.3 重组酵母菌的 Mut 型鉴定结果1282.4 重组酵母菌基因组 PCR 鉴定结果1292.5 表达蛋白的 SDS分析结果129表达蛋白的 Western-Blotting 分析结果1303 讨论131 第十一章 P32 表达蛋白的抗原性分析及间接 ELISA 方法的建立133 1 材料与方法 1341.1 材料 1341.2 方法 1352 结果1382.1 蛋白纯化的结果1392.2 P32 蛋白的抗原性检测1392.3 间接 ELISA 方法的建立1402.4 GPV P32 间接 ELISA 判定标准的确定1412.5 ELISA 方法的特异性检测1422.6 重复性试验1422.7 ELISA 方法的临床应用1433 讨论143第三部分 细胞凋亡研究 145第十二章山羊痘病毒诱导 BHK-21 细胞凋亡的检测 1451材料与方法 1461.1 材料 1461.2 方法 1472结果1492.1 H.E 染色1492.2 活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的鉴别 150TUNEL 法检测151Annexin V-FITC 检测152DNA Ladder 检测1533 讨论153结论 155致谢 157参考文献： 159附录一 发表论文与参见学术会议情况 171附录二主要英文缩写及含义 173山羊痘病毒某些生物学特性及其主要结构蛋白 P32 基因的研究摘要山羊痘是由羊痘病毒属（Capripoxvirus）山羊痘病毒（Goat poxvirus，GPV）引起的一种高 度接触性传染病，临床上以体温升高，全身皮肤、呼吸道和消化道黏膜出现痘疹为主要特征。 本病被世界动物卫生组织（OIE）列为 A 类重大动物传染病，我国也将其列为一类动物疫病 。 2002 年 10 月以来，贵州省羊群中首次暴发疑似山羊痘病例，并迅速波及到 8 个养羊较为集中的 地区，对我省养羊业的健康发展构成了巨大的威胁。为了防