胞核mcsf对人宫颈癌hela细胞药物抗性的影响-effect of nuclear mcsf on drug resistance of human cervical cancer hela cells.docx

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2018-06-28 发布于上海
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胞核mcsf对人宫颈癌hela细胞药物抗性的影响-effect of nuclear mcsf on drug resistance of human cervical cancer hela cells

目录中英文缩略词表1中文摘要2英文摘要4前言6材料与方法8结果13讨论23结论26参考文献27综述34攻读硕士学位期间完成、发表论文情况44致谢45中英文缩略词表缩略词英文全称中文全称AAbsorbance吸光度DDPCisplatin顺铂DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜FCMFlowcytometry流式细胞术FCSFetalcalfserum小牛血清MTT3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide溴化四甲基偶氮唑蓝M-CSFMacrophagecolony-stimulatingfactor,巨噬细胞集落刺激因子因子PIPropidiumiodide碘化丙啶TATPaclitaxel紫杉醇S.DStandandDeviation标准差HPLCHighperformanceliquidchromatogram高效液相色谱法PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液胞核M-CSF对人宫颈癌HeLa细胞药物抗性的影响硕士研究生：陈文琦指导教师：姜浩教授唐圣松教授中文摘要目的探讨胞核M-CSF对人宫颈癌HeLa细胞药物抗性的影响。方法分别以浓度为0.2μg/mL、2.0μg/mL、20μg/mL的顺铂或紫杉醇孵育HeLa细胞、HeLa-M细胞（M-CSF稳定转染并在核定位表达的HeLa细胞）、HeLa-C细胞（空载体稳定转染的HeLa细胞）48小时后，MTT法检测细胞相对活性、台盼兰拒染法测细胞存活率。分别以浓度为0.2μg/mL、2.0μg/mL、20μg/mL的顺铂或紫杉醇孵育HeLa-M细胞、HeLa细胞、HeLa-C细胞2小时后高效液相色谱法测细胞内顺铂和紫杉醇药物浓度；WesternBlot检测Bcl-2蛋白的表达。结果MTT比色法及台盼兰细胞计数法测定结果显示：在顺铂或紫杉醇浓度为2.0μg/mL、20.0μg/mL时，HeLa-M细胞对顺铂或紫杉醇的抗性显著高于HeLa细胞、和HeLa-C细胞（p0.01）,当顺铂或紫杉醇浓度为0.2μg/mL时，三种细胞对顺铂或紫杉醇的抗性无明显差别(p0.05)。在顺铂或紫杉醇三种浓度处理后，HeLa细胞与HeLa-C细胞的药物抗性无显著差异（p0.05）。AnnexinV/PI双染色流式细胞术分析结果显示：在顺铂或紫杉醇浓度为为2.0μg/mL、20.0μg/mL时，HeLa-M细胞凋亡率明显低于HeLa细胞与HeLa-C细胞组(p0.01)，当顺铂或紫杉醇浓度为0.2μg/mL时，三种细胞凋亡率相比无明显差别(p0.05)。在上述三种浓度处理后，HeLa细胞和HeLa-C细胞凋亡率无明显差异（p0.05）。高效液相色谱检测细胞内药物浓度显示：在顺铂或紫杉醇浓度为2.0μg/mL、20.0μg/mL时，HeLa-M细胞内顺铂浓度明显低于HeLa细胞与HeLa-C细胞组(p0.01)，当顺铂或紫杉醇浓度为0.2μg/mL时，三种细胞内药物浓度相比无明显差别(p0.05)。在上述三种浓度处理后，HeLa细胞和HeLa-C细胞内药物浓度无明显差异（p0.05）。WesternBlot显示：HeLa-M细胞Bcl-2蛋白的表达明显高于HeLa细胞和HeLa-C细胞（p0.01）。结论1.胞核M-CSF降低细胞内顺铂和紫杉醇的浓度,增强人宫颈癌HeLa细胞对顺铂和紫杉醇的抗性。2.胞核M-CSF上调人宫颈癌HeLa细胞Bcl-2蛋白的表达，抑制人宫颈癌HeLa细胞的凋亡。关键词巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，人宫颈癌细胞，细胞凋亡，多药耐药EffectsofnuclearM-CSFonthesensitivityofanti-tumorchemotherapeuticdruginhumancervicalcarcinomaHeLacellsABSTRACTOBJECTIVEToinvestigateeffectsofnuclearM-CSFonthesensitivityofanti-tumorchemotherapeuticdruginhumancervicalcarcinomaHeLacells.METHODSHumancervicalcarcinomaHeLacell,HeLa-Mcell(pCMV/cyto/myc-M-CSFtransfected-HeLacellthathighlyexpressesnuclearM-CSF,referredastoHeLa-Mcell)andHeLa-Ccell(vectorpCMV/cyto/myctransfectedHeLacell,referredastoHeLa-Ccell)wereculturedfor48ho