白藜芦醇对sod1-g93a小鼠腰髓和运动皮导lc3b的影响分析-effect of resveratrol on lc3b of so d1 - g93a mices lumbar spinal cord and motor cortex.docxVIP

目录中文摘要1英文摘要4研究论文白藜芦醇对SODl．G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的影响前言日U舌“?苍8材料与方法9结果”‘14附图15讨论22结论26参考文献“···O e U O26综述白藜芦醇对白噬的影响30致谢38个人简历-“39中文摘要白藜芦醇对SODl．G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的影响 摘要目的：肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)是一种进 行性致死性神经退行性疾病，以上下运动神经元受损为特征。临床表现为 肌无力，肌萎缩，呼吸肌麻痹，平均生存期为3．5年。ALS中运动神经元 的损伤和凋亡机制复杂，有多种机制参与，包括错误折叠蛋白聚集、氧化 应激、钙离子超载、谷氨酸兴奋毒性、营养因子缺乏、线粒体功能障碍等。 这些病理机制可能相互作用，促进了疾病的发生发展。前期试验中我们发 现，ALS中线粒体的分裂和融合及其线粒体自噬存在障碍。自噬(autophagy)是真核细胞的一种保护机制，可以通过自噬清除细 胞内的许多有害物质。自噬能够隔离包裹分解陈旧、过剩、损伤或者异常 的细胞器和其它胞浆成分，为细胞的正常生存、更新提供稳定的环境，保 障细胞高效率的新陈代谢，从而实现机体的平衡稳定。自噬包括巨自噬、 小自噬和分子伴侣介导的自噬三种方式。。目前许多研究关注巨自噬，巨自 噬也是我们此次研究的方向。微管相关蛋白1轻链3 (microtubule．associated protein 1 light chain 3，LC3)是酵母菌自噬相关基 因At98在哺乳动物的同源体。LC3有三种亚蛋白LC3A、LC3B、LC3C。 LC3I和LC3II是LC3在细胞内的两种存在形式。LC3I位于胞浆中是可 溶性物质，LC3II位于胞膜上与磷脂结合。LC3II是自噬泡的组成成分， 是自噬的标记物。自噬增强时，LC3I向LC3II的转变增多。在许多神经 退行性疾病中，胞浆、胞核或者细胞外基质聚集有破损的细胞器和异常蛋 白质等成分，这些异常聚集的物质具有细胞毒性，能够诱导细胞凋亡。细 胞可以通过自噬清除有害物质，‘自噬维持了细胞内环境的稳定。自噬也就 成为治疗神经退行性疾病的靶点。白藜芦醇(resveratrol，res)是一种自然源性酚类物质。有报道，在阿尔 兹海默病(Alzheimer’S diseases，Ao)、帕金森病(Parkinson’S disease，PD) 中，白藜芦醇可以激动Sirtl(silent mating type information regulation 2 homolog 1)或者AMPK(AMP．activated protein kinase)，从而诱导自噬，中文摘要提高LC3水平。白噬的增强可以更好的降解异常蛋白，保护神经元。AD、 PD和ALS都是神经变性病，白藜芦醇在ALS中是不是也可以调节自噬， 影响LC3水平，保护神经元呢?本实验我们试图观察，随着疾病的进展， LC3B在SODl．G93A小鼠腰髓和运动皮层中的动态变化，及其予以白藜 芦醇后，SODl一G93A小鼠腰髓和运动皮层中LC3B的变化，进一步了解 ALS的病理机制，探讨白藜芦醇通过影响自噬治疗ALS的可行性。方法：实验组实验对象选取SODl一G93A转基因小鼠，依据病程分为 症状前期组(60d组)、症状早期组(onset组)、终末期组(end组)，对 照组实验对象选取90天野生型小鼠，每组6只小鼠。从70天开始，予以 SODl．G93A小鼠三种不同处理方式，直至症状早期或者终末期取材。三 种不同处理方式分别为：白藜芦醇组予以白藜芦醇溶剂(30mg／kg／d)，溶 剂组予以同等体积酒精溶剂，空白组未予处理。症状早期和终末期的不同 处理组均有6只小鼠用于实验。腹腔注射10％水合氯醛(350mg／kg)，麻醉 小鼠后，处死小鼠，取腰髓和运动皮层投入液氮冷冻，保存于．80。C冰箱； 经心脏灌注4％多聚甲醛，剥离小鼠腰髓和运动皮层，用4％多聚甲醛浸 泡保存。利用Western blot技术、免疫组织化学技术、’激光共聚焦技术， 观察LC3B、在各时期及各种不同处理方式下小鼠腰髓和运动皮层中的变 化。数据应用spssl3．0统计软件进行分析。结果：1不同时期SODl．G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的含量：应用Western blot技术检测到，与对照组相比，症状早期和终末期SODl．G93A小鼠腰 髓和运动皮层中LC3BII表达量增加，症状前期LC3BII表达量无明显变 化。免疫组织化学显示，与对照组相比，症状早期和终末期SODl．C03A 小鼠腰髓和运动皮层中运动神经元减少，LC3B表达量增加，症状前期 LC3B表达量无明显差异。激光共聚焦技术检测LC3B与SMl32共定位情况，与