白藜芦醇对大鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的分析-protective mechanism of resveratrol against cerebral ischemia-reperfusion injury in rats.docxVIP

目录 摘 要 2 ABSTRACT 4 前 言 6 材料与方法 9 1.材料及试剂 9 2. 动物及处理 10 3. 神经功能缺陷评分 12 4. 灌注、取材及石蜡块制作 12 5. 石蜡切片 13 6. 脑梗死体积测定 13 7. 组织免疫荧光量子点检查 14 8. WESTERN-BLOTING 15 9. 统计分析 19 结果 21 1.白藜芦醇改善大鼠脑缺血性卒中后的神经功能 21 2.白藜芦醇神经保护作用的机制 23 讨论 30 实验结论 35 参考文献 36 致谢 39  英文缩略词表及中文对照 英文缩写 英文全称 中文全称 Resveratrol Resveratrol 白藜芦醇 CREB cAMP response element binding protein cAMP 反应元件结合蛋白 Calpain Calpain 钙蛋白酶 TRPC Transient receptor potential cation channel 瞬时受体电位阳离子通道 CaM calmodulin 钙调蛋白 MEK Methyl Ethyl Ketone 甲基乙基酮 ERK Extracellular signal-regulated kinase 细胞外信号调节激酶 CaMKⅣ Calmodulin kinase 钙调蛋白激酶Ⅳ NMDA N-methyl-D-aspartic acid N-甲基-D-天冬氨酸 I/R Ischemic/reperfusion 缺血再灌注 MCAO Middle cerebral artery occlusion 大脑中动脉栓塞 TTC 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride 2,3,5-氯化三苯基四氮唑  白藜芦醇对大鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科 硕士研究生： 陈方 导师 ： 姚尚龙 教授 摘 要 背景：局灶性脑缺血是造成脑卒中的一个最常见的原因，研究显示局灶性脑缺 血引起的神经损伤是由一系列病理过程导致的，导致神经损伤的机制也是错综 复杂，治疗药物的针对性不强。虽然临床上有一些治疗措施，但是脑卒中后所 引起的神经功能损伤以及再次复发的几率仍然很高，因此研究其针对性治疗措 施及药物显得极其重要。研究证明白藜芦醇具有抗氧化应激，抗衰老，抗炎等 作用，在脑缺血再灌注损伤具有保护作用，但是其机制纵说纷纭。 目的：观察给予白藜芦醇后大鼠脑缺血再灌注后的神经功能变化，探讨白藜芦 醇对大鼠脑缺血再灌注后的神经保护作用是否通过抑制 calpain 对 TRPC6 的降 解从而引起 p-CREB 水平升高所致。 方法：雄性 SD 大鼠，选择大脑中动脉栓塞（MACO）模型模拟大鼠脑缺血再灌注 损伤。连续腹腔注射白藜芦醇（200mg/kg）6 天进行白藜芦醇预处理，并于第 七天模型制备前 1h 再给予一次，根据分组分别于模型制备前 20min 给予 MEK 抑 制剂 PD98059 或 CaMKIV 抑制剂 KN62，缺血后两小时拔出栓塞线，于再灌注后 24h 行神经功能评分、TTC 染色检测脑组织梗死体积，采用免疫印迹 检测 SBDP145(Calpain 对 aII-spectrin 的特异性裂解产物), TRPC6 和 p-CREB 的含  量，以及量子点免疫荧光技术反映 TRPC6 及 p-CREB 的变化。 结果：缺血组与假手术组相比，梗死体积和神经功能缺陷评分降低。白藜芦醇 预处理后，大鼠缺血再灌注后 24h 的神经功能评分升高，梗死面积减少。使用 MEK 或者 CaMKIV 被 PD98059 或者 KN62 抑制后，白藜芦醇的神经保护作用降低， 并伴随轻微的 CREB 活性的降低，而同时使用二者时，白藜芦醇的神经保护作用 基本消失，CREB 活性降至最低。 结论 ： 白 藜 芦 醇 预 处 理 对 大 鼠 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 的 保 护 作 用 可能 是通过 TRPC6-Ras/MEK/ERK -CREB 和 TRPC6-CaM/CaMKIV-CREB 两条信号途径共同实现 的. 关键词： CREB 脑缺血 神经保护 白藜芦醇 TrpC  Neuroprotective mechanism of resveratrol on ischemic/reperfusion injury in rats Department of Anesthesiology, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technolog