鼓槌石斛多糖的分离纯化、结构表征及免疫调节活性分析-isolation, purification, structural characterization and immunoregulatory activity analysis of dendrobium nobile polysaccharides.docxVIP

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2018-07-05 发布于上海
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鼓槌石斛多糖的分离纯化、结构表征及免疫调节活性分析-isolation, purification, structural characterization and immunoregulatory activity analysis of dendrobium nobile polysaccharides

鼓槌石斛多糖的分离纯化、结构表征及免疫调节活性研究摘要鼓槌石斛（Dendrobium chrysotorum Lindl.）是兰科石斛属中的一种药食兼用植物，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效，多糖是其发挥生理活性功能的物质基础。本文在分析鼓槌石斛营养组成的基础上，优化了鼓槌石斛多糖脱蛋白方法，并对水溶性鼓槌石斛多糖进行了分离纯化、结构表征及免疫调节活性研究，得到以下结果：（1）营养成分测定表明，鼓槌石斛总糖、还原糖、粗脂肪、蛋白质和灰分的含量分别为 33.68、0.57、6.63、1.40 及 2.60 g/100g DW。（2）经热水、碱、酸提取，分别得到水溶性总多糖（DCP-W）、碱溶性总多糖（DCP-B）和酸溶性总多糖（DCP-A），它们的得率分别为 5.28%、0.71% 和 0.29%，脾细胞增殖实验显示 DCP-W 的免疫活性明显高于 DCP-B 和 DCP-A。（3）Sevag 法、TCA 法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶联合 Sevag 法四种脱蛋白方法试验结果显示，木瓜蛋白酶联合 Sevag 法对鼓槌石斛水溶性多糖的脱蛋白效果最佳，其蛋白脱除率达到 70.68%，多糖损失率仅为 6.28%。（ 4）通过 DEAE-Cellulose 阴离子交换层析及葡聚糖凝胶层析分离，从 DCP-W 获得了 3 个均一组分：DCP-W1、DCP-W2 和 DCP-W3，它们的平均相对分子质量分别为 0.92 × 104 Da、1.83 × 106 Da 和 1.96 × 106 Da。通过 FT-IR、 GC、GC-MS、NMR 等仪器分析及全水解、甲基化等化学分析方法，得出 DCP-W1 由摩尔比为 2.9 : 6.9 的 Man 和 Glc 组成，DCP-W2 由摩尔比为 0.9 : 6.1 : 9.0 : 1.0 的 Ara、Man、Glc 和 Gal 组成，DCP-W3 由摩尔比为 3.4 : 17.9 : 5.1 : 12.2 : 24.6 :的 Rha、Ara、Xyl、Man、Glc 和 Gal 组成，并推断得到 DCP-W1、DCP-W2和 DCP-W3 的可能结构如下：DCP-W1 的重复结构单元为：α-D-Glcp(1→4)-α-D-Glcp1↓4→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Manp-(4→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Manp-(4→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Manp-(4→1)-α-D-Glcp-(6→2↓OAC2↓OACDCP-W2 的重复结构单元为：α-L-Araf1↓4α-D-Glcp-(1→4)-α-D-Glcp1↓4→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Glcp- (6→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Manp-(4→1)-α-D-Glcp-(6→1)-α-D-Manp-(6→1)-α-D-Manp-(4→1)-α-D-Glcp-(6→32↓↓Gaα-D- 1 lpOACDCP-W3 为一个以 1,4-linked GalAp 和 1,2-linked Rhap 按 1：1 连接的主链结构和以半乳糖、甘露糖、葡萄糖、木糖主要连接于鼠李糖 O-4 位以及少量连接在半乳糖醛酸的 O-3 位的侧链组成的果胶类杂多糖。关键词：鼓槌石斛；多糖；分离纯化；结构鉴定；免疫调节活性 Extraction, purification, structural idenfication and immunoregulating activity of polysaccharides from Dendrobium chrysotorum Lindl.ABSTRACTDendrobium chrysotorum Lindl., which belongs to Dendrobium Sw o f Orchidaceae, is an edible medicinal plant which has the functions of nourishing body, clearing within fire, moistening lung, maintaining stomach tonicity and so on. The polysaccharide is one of the main and important active substance. In this paper, firstly, the nutritional c