磁螺菌msr-1磁小体合成相关基因mrna差异显示分析-mrna differential display analysis of msr - 1 magnetosomes synthesis related genes in helicobacter pylori.docxVIP

磁螺菌 MSR-1 磁小体合成相关基因 mRNA 差异显示分析 摘 要：趋磁细菌(Magnetotactic bacterium，MTB)是一类能够在体内形成磁小 体(Magnetosome)并实现趋磁运动的细菌。磁小体是一种由生物膜包被的纳米磁 性颗粒，由趋磁细菌相关基因控制合成。针对趋磁细菌的研究主要包括趋磁细 菌的生长环境和培养机制、磁小体合成机制、磁小体的分离纯化及其应用等方 面，但磁小体合成机制的研究为重中之重。目前，已分离出一些与趋磁细菌磁 小体合成相关的基因和蛋白，但与磁小体合成相关基因很多，进一步寻找和克 隆与磁小体合成相关基因仍十分重要。 本文以趋磁细菌中的模式菌株格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌 (Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1作为研究对象，通过差异显示法寻找与磁小体合成相关 新基因。通过在相同类型容器中加入不同培养基的量，比较磁小体合成情况， 结果是：40%装瓶量会得到产磁小体菌株，10%装瓶量得到不产磁小体的菌株。 分别提取产和不产磁小体菌株的RNA并对其纯度、浓度和完整性进行检测。通 过引物的验证，使用引物1：CGCCGCCGCC和引物2：CCGCCGCCGC对产磁小体菌 株和不产磁小体菌株的RNA分别进行RAP-PCR，获得了5条差异片段，将5条差 异片段分别命名为M-1、M-2、M-3、M-4、M-5，并利用软件对其功能进行分析 预测，结果如下：M-1编码蛋白为MSR-1未知功能蛋白。M-2推测蛋白质具有保 守结构域rpoH2，作用为在特定的位置生产能够启动转录的 全酶。从而推测 此 片 段 编 码 的 蛋 白 可 能 是 识 别 MSR-1中 磁 小 体 合 成 相 关 基 因 起 始 位 点 的 酶。片段M-3和片段M-4推测蛋白质均含有保守结构域MqsR，MqsR对生物膜 形成具有重要的调节作用。磁小体是具有生物膜包被的，因此推测此片段 可能与磁小体外膜的形成有关。 片段M-5推测的蛋白质具有结构域PPK2和 ALDH-SF，其中PPK2超家族是参与多磷酸盐代谢的酶类，与细胞能量代谢 有关，而ALDH-SF 超家族是依赖醛脱氢酶，此酶包含 NAD(P)辅助因子结 构域，催 化结构域 和 桥接结构 域 3个结构 域，因为 NAD(P)在 NADH的还 原 作用中起催化作用并且NADH可以为三价铁还原酶提供能量，三价铁还原 I II II 酶参与磁小体的形成 过程，因此我们推测 片段M-5编码蛋白的功能可能是 为磁小体合成提供能量。 关键词：趋磁细菌、磁小体、格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌、氧分压、差异片段 PAGE PAGE IV Differential display analysis of Magnetic spirillum MSR-1 Magnetosome Gene Synthesis mRNA Abstract：The Magnetotactic bacterium (MTB) can generate magnetosome and realize magnetotactic movement. Magnetosome is a kind of magnetic nanoparticles coated by biomembrane. The synthesis of it is controlled by the genes of MTB. The research of MTB mainly contains the growing environment and training mechanism of MTB, the synthesis, separation, purification and application of magnetosome. Among them, the synthesis of magnetosome is one of the most important parts. At present, some genes and proteins related to magnetosome synthesis are separated. However, there are lots of genes related to magnetosome synthesis. It is important to find and clone more genes related to magnetosome synthesis. This paper focused on Magnetospirillum gryphiswaldense, which is a kind of magnetotactic bac