番石榴叶乙醇提取物化学成分研究.docVIP

番石榴叶乙醇提取物化学成分研究 　　[摘要]采用多种色谱手段，对番石榴叶95%乙醇提取物的化学成分进行分离和纯化，并根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。从番石榴叶中分离得到18个化合物，分别为（+）-globulol（1）， clovane-2β，9α-diol（2）， 2β-acetoxyclovan-9α-ol（3），（+）-caryolane-1，9β-diol（4）， ent-T-muurolol（5）， clov-2-ene-9α-ol（6）， 异植物醇（7）， 柽柳黄素（8）， 棉花素（9）， 槲皮素（10）， 山柰酚（11）， guajaverin（12）， avicularin（13）， chrysin 6-C-glucoside（14）， 3′-O-methyl-3， 4-methylenedioxyellagic acid 4′-O-β-D-glucopyranoside（15）， 对羟基苯甲酸（16）， guavinoside A（17）和guavinoside B（18）。化合物2～9， 14～16为首次从该植物中分离得到。体外抗肿瘤活性筛选表明，番石榴叶95%乙醇提取物在60 mg?L-1下对SW480细胞的抑制率达到61.3%。 　　[关键词]番石榴叶； 倍半萜； 二萜； 黄酮； 酚酸； 抗肿瘤 　　番石榴为桃金娘科Myrtaceae番石榴属Psidium的多年生木本植物，广泛分布于南美洲、非洲和亚洲的热带及亚热带地区[1]。番石榴叶作为民间传统草药，具有生津止渴、收敛止泻等功用，多用于治疗糖尿病、痢疾等疾病[2-3]。近年来有文献报道番石榴叶提取物表现出一定的抗肿瘤活性[4-5]。为进一步探索番石榴叶的药效作用物质基础，为其资源开发及品质评价提供科学依据，本实验对番石榴叶进行了较为系统的化学成分研究。从番石榴叶的95%乙醇提取物的石油醚部位和正丁醇部位中分离并鉴定了18个单体化合物，其中化合物2～9， 14～16为首次从该植物中分离得到。此外，对化合物12～15，17，18以及番石榴叶的95%乙醇提取物（Fr.A）进行了体外抑制人结肠癌细胞SW480实验，结果表明，当浓度为60 mg?L-1时，Fr.A表现出较强的抑制细胞增殖活性，抑制率为61.3%，各被测单体化合物仅表现出微弱的抑制活性。 　　1 材料 　　X-5型显微熔点测定仪（温度计未校正），Bruker AV-400型核磁共振仪，Finnigan LCQ Advantage MAX型质谱仪，Dionex分析型高效液相色谱仪，Varian制备型高效液相色谱仪。柱色谱用硅胶（60～100目和200～300目，青岛海洋化工厂），硅胶GF254薄层预制板（烟台化学工业研究所），D101型大孔吸附树脂（天津海光化工公司），ODS柱色谱材料（Merck公司），Sephadex LH-20柱色谱材料（Pharmacia），其他所用试剂为分析纯或色谱纯。 　　结肠癌SW480 细胞株由本实验室保存，RPMI 1640 培养基（美国Gibco公司），胎牛血清，磷酸盐缓冲液（PBS，美国Hyclone公司），甲基耦氮唑蓝（MTT）、DMSO、胰蛋白酶（美国Sigma公司），全自动CO2孵箱（美国杜邦公司Napoc6100），450型酶标仪（美国BioRadgs公司），YZ-1450 型层流超净工作台（苏州净化设备公司）。 　　实验用药材于2007年10月采自广东省从化市，经广东药学院李书渊教授鉴定为番石榴P.guajava的叶，标本（No.2007101801）保存于暨南大学中药及天然药物研究所。 　　2 提取与分离 　　番石榴叶药材20.0 kg，粉碎后过60目筛，95%乙醇室温渗漉提取3次，合并提取液，过滤，减压浓缩得浸膏约1 500 g。浸膏加适量水混悬，依次用石油醚、氯仿和正丁醇萃取，萃取液分别减压浓缩，得石油醚部位（300 g），氯仿部位（500 g），正丁醇部位（300 g），其余为水部位。石油醚部位经硅胶（200～300目）柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯（100∶0～1∶1）梯度洗脱，得到12个流分（Fr.p1～Fr.p12）。Fr.p4（7 g）经硅胶色谱柱，石油醚-乙酸乙酯（100∶0～100∶10）洗脱，得到7个亚流分（Fr.p4a～Fr.p4g），Fr.p4c（2 g）经硅胶色谱柱，石油醚-乙酸乙酯（100∶0～100∶5）洗脱，得到化合物1（3 mg），3（4 mg）和7（5 mg）。Fr.p6（7 g）经硅胶色谱柱，石油醚-乙酸乙酯（100∶5～100∶10）洗脱，重结晶后得到化合物2（25 mg），4（9 mg）和6（2 mg）。Fr.p7经硅胶色谱柱，以石油醚-乙酸乙酯（100∶15）为洗脱剂，经重结晶得化合物5（3 mg）。正丁