红芪多糖HPS1―D化学结构和抗补体活性研究.docVIP

红芪多糖HPS1―D化学结构和抗补体活性研究 　　[摘要] 目的：红芪多糖HPS1-D的化学结构、初步构象和抗补体活性的研究。方法：红芪经水提醇沉法提取、Sevage法脱蛋白、H2O2脱色素、SephadexG-100色谱柱分离纯化得到均一的红芪多糖HPS1-D。以GC、高效液相凝胶色谱法（HPLC-GPC）、凝胶渗透色谱-多角度激光散射仪联用法（GPC-MALLS）、元素分析、苯酚硫酸法、Bradford法、硫酸咔唑法研究其理化性质；采用甲基化、部分酸水解、以及NMR研究其连接方式、主链和支链结构及分支点状况；以GPC-MALLS、对其构象进行初步分析；采用细胞溶血法对其抗补体活性进行研究。结果：HPS1-D主要由葡萄糖和阿拉伯糖组成，主链骨架由1，4和1，4，6-α-D-Glcp，侧链分支位于葡萄糖6位；侧链分支主要由1，5和1，3，5-α-L-Araf 组成；相对分子质量为5.2×105，在0.9% NaCl溶液中为无规则线团；抗补体实验表明HPS1-D有一定程度的抗补体活性，并呈一定的剂量效应关系。结论：HPS1-D为1种新的中性红芪杂多糖，具有一定的抗补体活性。 　　[关键词] 红芪；多糖；结构；构象；抗补体 　　[收稿日期] 2013-09-05 　　[基金项目] 国家“十二五”科技支撑计划项目（2011BAI05B02） 　　[通信作者] *封士兰，教授，Tel： Fax： （0931） 8915686，E-mail： fengshl@lzu.edu.cn 　　[作者简介] 杨涛，硕士研究生，Tel红芪系豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪Hedysarum polybotrys Hand. -Mazz的根，为甘肃特产名贵药材，在中医理论中红芪用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，血虚萎黄，内热消渴[1]等。多糖做为红芪的主要活性成分有着特殊的生物活性，目前各种研究显示红芪多糖具有抗癌、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等功效[2-7]。研究表明，一些多糖还具有抗补体的作用，能够抑制补体系统过度活化引发的炎症和损伤[8]。关于红芪多糖的抗补体活性研究未见报道。本实验从红芪多糖HPS1中分离出一种均一组分，对其结构和抗补体活性进行了研究。 　　1 材料 　　BP211D 型与BS224S 型电子天平（德国Sartorius 公司）；UV-1700紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；DHG-9075A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒）；KQ-3200DE 超声波仪器（江苏昆山公司）；BS-100N 自动部分收集器，BT100N数显恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）。CR22GⅡ离心机（日本日立）；Freezone 6PWS 型真空冷冻干燥仪（美国LABCONCO）；透析袋（截留相对分子质量3500，美国科技发展公司）；multi EA 4000 元素分析仪（德国Elementar Analysensysteme 公司）；Dawn HeleosⅡ型十八角度激光散射仪（美国怀雅特技术公司）；Waters 600 高效液相色谱仪（美国Waters 公司）UltrahydrogelTM 1000，500 色谱柱（美国Waters 公司）；GC 2014 型气相色谱仪（日本岛津公司）；GC-450， MS-320（美国Varian 公司）；OV-101毛细管色谱柱（兰州中科安泰分析科技有限责任公司）；600 MHz Inova 600 NB 核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；Well scan MK3 型酶标仪（Thermo Labsystems 公司，芬兰）。单糖对照品：葡萄糖（ Glc， Service 公司） 、甘露糖（Man， Dr. Ehrentorfer 公司） 、木糖（Xyl） 、半乳糖（Gal）为BioSharp 公司产品、鼠李糖（Rha）等为国产AR级。溶血素1∶4 000 Sigma 公司（ 美国）；三氟乙酸（TFA）与二甲基亚砜（DMSO）购自Merck公司。纯水用Milipore 2Q超纯水系统制得。2%绵羊红细胞、豚鼠血清均来自兰州大学实验动物中心。 　　红芪样品购自甘肃武都，经兰州大学药学院马志刚教授鉴定为多序岩黄芪H. polybotrys的根。干燥、粉碎后备用。 　　2 方法 　　2.1 提取与分离纯化 粉碎的红芪药材，用95%乙醇回流3次，后用60 ℃水提取3次，提取液浓缩至生药浓度1 g?L-1，加入95%的乙醇至乙醇浓度达到30%，在4 ℃静置过夜，离心，收集沉淀，冷冻干燥得红芪粗多糖1（HPS1）。HPS1经Sevage 法脱蛋白[9]和H2O2除色素[9]后再次醇沉，透析，冷冻干燥。用