G50固定化条件优化和载体稳定性测定实验设计方案.docVIP

G50固定化条件优化及载体稳定性测定实验设计方案方案主要思路：考察 6种大孔树脂对脂肪酶G50的固定化情况，筛选出 3种较佳载体对脂肪酶G50进行固定化，并对固定化条件进行优化，包括Ph和脂肪酶添加量； 选用载体刚性，球磨机试验两个参数对上述的3种树脂进行稳定性考察，最后选出脂肪酶G50最佳载体。1.1实验方法1.1.1采用甘油二酯乳化法测定脂肪酶G50的活力：在三角瓶中加入甘油二酯乳化液4 mL(其中二酯 1 mL，4%的聚乙烯醇3 mL并于 10 000 rpm下均质 10 min)和pH=5.0的 KH2PO4-Na2HPO4缓冲液(0.05 mol/L)5 mL，于30°C的恒温磁力搅拌器中预热 5 min，然后加入酶粉10mg，并开始计时，保温反应10min 后立即加入95%的乙醇15 mL终止反应；加入酚酞指示剂，用标定过的浓度约为0.05 mol/L的KOH溶液滴定水解释放出的游离脂肪酸，记录KOH消耗的体积；空白试验是在预热后的反应体系中先加入 95%的乙醇再加入热失活处理过的酶液1 mL(取2 mL的酶液100°C 下加热15 min，冷却至室温后使用)后反应30 min，其他操作同前。 酶活力的定义为：在上述条件下，单位时间内(每分钟)生成 1 μmol 可滴定脂肪酸所需的酶量为1个活力单