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龙须菜高温胁迫抑制性消减杂交文库构建 　　摘要：龙须菜（Gracilaria lemaneiformis Bory）是重要的产琼胶海藻。本文采用抑制性消减杂交（SSH）技术构建了龙须菜高温胁迫差异表达cDNA文库，筛选到360个阳性克隆。测序结果经比对初步确定功能的基因56个，按功能分为：细胞防御；细胞信号转导；能量传递；蛋白质转录、翻译；代谢相关等几大类。研究结果为进一步研究龙须菜响应高温胁迫的分子机制提供了基础。 　　关键词：抑制性消减杂交；龙须菜；高温；cDNA 　　Construction of Suppression subtractive hybridization library of Gracilaria lemaneiformis under heat stress 　　Zang Xiaonan*， Zhang Xuan， Gu Yinghui， Lu Ning， Li Guangqi， Zhang Xuecheng， Zhang Lu， Tan Yanmiao， Yan Aiting 　　（College of Marine Life Sciences， Key Laboratory of Marine Genetics and Breeding （Ocean University of China）， Ministry of Education， Qingdao 266003，China） 　　Gracilaria lemaneiformis is one of the most important economical marine algae in China. In order to gain a mechanism of responce of G. lemaneiformis to heat stress， the suppression subtractive hybridization （SSH） between the cDNA library of the wild type that lives in common condition and under the heat-stress is used to make up the cDNA discrepancy library. In the discrepancy library， there are 360 positive clones are selected by differential screening. By sequencing and BLAST， 56 differential genes that response to the heat stress are selected. The function of the differential genes can be divided into Cell defense， Cellular signal transduction， Energy transfer， Protein transcription and translation， Metabolism. The results provide bases for further study the molecular mechanism of Gracilaria lemaneiformis response to high temperature stress. 　　Key words：Suppression subtractive hybridization；Gracilaria lemaneiformis；heat stress；cDNA 　　龙须菜（Gracilaria Lemaneiformis）是红藻门（Rhodophyta）、江蓠属（Gracilaria）的一种重要产琼胶海藻。野生型龙须菜适温范围窄（11° C～23° C），生长期短，而在野生龙须菜基础上驯化并筛选的优良品系981龙须菜，使龙须菜的耐高温性能从23° C提高到了26° C，延长了栽培期，提高了产量[1]。但是目前产业化需要进一步提高龙须菜的耐高温性能，以适应夏季的高温。研究龙须菜高温胁迫响应机制，将为促进龙须菜耐高温新品系的选育起到有利的支撑作用。 　　自1992年Liang和Pardee首次提出了mRNA差异显示技术以来，已发展了多种分离和鉴定差别表达基因的技术[2]。抑制性消减杂交（SSH）是一种极为有效的差减杂交技术，它可以在抑制非目的DNA片段扩增的同时，选择性的扩增差异表达目的cDNA片段[3]。SSH技术在藻类中应用的并不多，但近年来利用该技术研究藻类的报道也在逐年增多，主要集中在发育相关基因、胁迫条