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马齿苋多糖对雏鸡免疫功能影响 　　摘要：采用马齿苋多糖口腔灌注雏鸡，观察对雏难法氏囊免疫功能的影响。试验选取80只1日龄雏鸡随机分为4组，1个空白对照组及3个POP试验组，POP剂量分别为25，50和100 mg/kg，每天口腔灌注1次，连续20 d。结果显示，POP能显著提升外周血CD4+T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+比值（P　　关键词：马齿苋多糖；雏鸡；淋巴细胞增殖指数；法氏囊指数；CD4+/CD8+ 　　中图分类号：S 816.75文献标识码：A文章编号：1009??5500(2014)03??0073??04 　　基金项目：河北省科技支撑计划项目和河北省教育厅青年基金（2011231）资助 　　 　　 　　随着生物医药等学科的飞速发展，天然多糖以其抗氧化、促免疫、抗肿瘤、消炎、抗病毒及高效低毒等特性越来越引起人们的关注\[1，2\]。马齿苋（Portulaca oleracea）为马齿苋科植物马齿苋的全草，含有氨基酸、维生素等多种营养成分及L?踩ゼ咨錾舷偎亍⒍喟兔鳌⒒仆?类和多糖等生物活性物质。马齿苋多糖（Portulaca oleracea polysaccharide，POP）是马齿苋的主要有效成分之一，临床研究认为，POP具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂以及免疫增强作用\[3-11\]。目前,有关POP在养殖业上的应用研究较少，试验采用POP口腔灌注雏鸡，观察其对雏鸡法氏囊免疫功能的影响，以期揭示POP免疫调节的机理，为马齿苋多糖在畜禽养殖上的应用提供理论参考。 　　1材料和方法 　　1.1仪器和试剂 　　试验采用流式细胞仪（BD FACSAria，美国）；试剂为淋巴细胞分离液，PE（苯肾上腺素）荧光标记小鼠抗鸡CD4、CD8抗体、碘化丙啶、ConA均购自生工生物工程（上海）股份有限公司。 　　1.2试验动物 　　试验用1日龄雏鸡均由河北北方学院牧业研究所提供，3层笼养育雏，采用正大蛋雏鸡料饲喂，自由采食和饮水。 　　1.3马齿苋多糖的提取 　　采新鲜马齿苋全草，经50 ℃烘干，粉碎，依次利用石油醚、80%乙醇脱去脂肪和小分子糖类，利用水提取法提取POP，再利用95%乙醇沉淀，离心，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，经真空干燥制得马齿苋粗多糖，利用苯酚硫酸法测定多糖含量。 　　1.4动物试验方法 　　选取1日龄健康蛋雏鸡80只，随机分为4组，分别为1个空白对照组（Ⅰ）和3个马齿苋多糖试验组，即试验Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ（POP剂量25，50和100 mg/kg）组，每组20只鸡，马齿苋多糖经雏鸡口腔灌服，每天1次，连续20 d，对照组灌服等量生理盐水。试验鸡饲喂相同基础日粮，自由采食和饮水。 　　1.5免疫功能检测 　　试验结束后每组试验鸡无菌采血，EDTA抗凝，分离淋巴细胞，加入荧光标记的CD4、CD8抗体，利用流式细胞仪进行检测，Cell Quest软件分析T淋巴细胞亚群百分率；取血后全部剖杀，并无菌摘取法氏囊，准确称量湿重，计算法氏囊指数；随后取适量法氏囊组织块，利用机械法制备细胞样品，即取组织块在200目的铜网上搓，并用PBS向下冲洗细胞，离心收集细胞，经400目网过滤，PBS洗涤制成单细胞悬液，调整细胞数为1×106个，碘化丙啶综合染液染色30 min，用流式细胞仪进行检测，采用Medifit软件分析处于静止期（G0/G1期）、DNA合成期（S期）、分裂期（G2/M期）的细胞数量百分比，计算细胞增殖指数（PI）。 　　PI=（S+G2/M）/（G0/G1+S+G2/M）×100% 　　1.6数据统计分析 　　所有数据采用SPSS 11.0进行分析处理，不同剂量采用多重比较，差异P0.05）；CD8+T淋巴细胞数量随POP浓度的升高也有增加的趋势，但不同浓度的POP组之间差异不显著（P0.05）；CD4+/CD8+以试验Ⅲ组最高，为1.98，显著高于其他 　　 　　表1PDP对雏鸡外周血T淋巴细胞亚群和法氏囊指数的影响 　　Table 1Effects of POP on CD4+/CD8+ and Fabricius bursa indices 　　 　　组别 Ⅰ（0 mg?kg-1） Ⅱ（25 mg?kg-1） Ⅲ（50 mg?kg-1） Ⅳ（100 mg?kg-1） 　　CD4+/% 32.34±0.32a 34.61±0.53ab 38.47±0.80c 36.68±0.39bc 　　CD8+/% 18.65±0.15a 18.92 ±0.44ab 19.39±0.75bc 20.33±0.49bc 　　CD4+/CD8+ 1.73±0.76a 1.83±1.01ab 1.98±0.43c 1.80±0.72b 　　法氏囊指数/mg?g-1 3.58±1.02a 3.83±0.85b 4.23±0