慢性乙型肝炎不同免疫时相期nk细胞功能的分析-analysis of nk cell function in different immune phases of chronic hepatitis b.docxVIP

中英文缩写名词对照表英文缩写英文全文中文IAImmuneactivation免疫活化ITImmunetolerance免疫耐受ACLFacuteonchronicliverfailure慢加急性肝衰竭TNFTumornecrosisfactor肿瘤坏死因子rhILrecombinatedhumaninterleukin人重组白介素ALTalaninetransaminase丙氨酸氨基转移酶ADCCantibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity依赖于抗体的细胞介导的细胞毒性MHCmajorhistocompatibilitycomplex主要组织相容性复合体HLAHumanleukocyteantigen人类白细胞抗原DCDendriticcells树突细胞CTLcytotoxicTlymphocyte细胞毒性T淋巴细胞IL-10Interleukin-10白细胞介素-10PBMCperipheralbloodmononuclearcell外周血单个核细胞ThThelpercellsT辅助细胞ULNupperlimitsofnormal正常值上限M-CSFMacrophagecolonystimulatingfactor巨噬细胞集落刺激因子GM-CSFgranulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子TRAILTNF-relatedapoptosis-inducingligand肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体慢性乙型肝炎不同免疫时相期NK细胞功能的研究硕士研究生刘倩导师赵西平教授华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科，临床免疫研究室摘要目的1、研究慢性HBV感染患者不同时期NK细胞功能的变化，以及与ALT水平、病毒载量的关系。2、横向分析慢性HBV相关慢加急性肝衰竭患者，不同血清总胆红素水平下NK细胞功能状态的差异，以及与ALT水平、病毒载量的关系。3、比较患者在治疗过程中，NK细胞频率及功能变化。方法1、63例慢性HBV感染者分为（1）HBV-相关的慢加急性肝衰竭患者18例，应用核苷类似物抗病毒综合治疗，在治疗过程中，87次抽取外周血，根据血清总胆红素分为3组即Tbil≥10ULN（正常上限值）（例次=59）、5ULN＜Tbil＜10ULN（例次=17）、Tbil＜5ULN（例次=11），（2）慢性HBV感染后处于免疫活化期患者30例，未行抗病毒治疗，（3）感染后处于免疫耐受期患者15例。健康对照32例，排除其他病毒及急性HBV感染，无其他肝炎病史。取外周肝素钠抗凝血5ml备检。2、时间分辨荧光免疫定量技术（TRFIA）定量检测乙肝病毒标志物五项指标即乙肝表面抗原及抗体(HBsAg和HBsAb)；e抗原及e抗体(HBeAg和HBeAb)；核心抗体(HBcAb)。应用Realtime-PCR定量检测HBV-DNA水平。雅培全自动生化仪检测肝功能九项指标。3、采用EZ-Sep?人淋巴细胞分离管分离出外周血淋巴细胞（PBMC）。4、流式细胞术检测NK细胞频率、亚型、NK细胞表面受体（活化性受体/抑制性受体）表达水平，5、细胞内因子染色后检测NK细胞分泌γ-干扰素、肿瘤坏死因子-α等细胞因子的水平。6、细胞内因子染色后检测NK细胞分泌颗粒酶B、穿孔素，分析NK细胞细胞毒活性。7、FlowjoSoftware对流式图进行处理，SPSS20.0对数据进行统计分析，p值0.05认为有显著差异性。结果1、慢性HBV感染不同时期NK细胞频率及功能分析（1）与健康对照组相比，慢性HBV感染不同时期PBMC中NK细胞频率均显著降低(P0.05)，NK细胞亚型CD56dim频率均低于健康对照组(P0.001)，而NK细胞亚型CD56bright频率均高于健康对照组(P0.001)。各组之间比较，慢加急性肝衰竭患者NK细胞频率低于IA组、IT组(P0.05)。（2）与健康对照组相比，IA组NK细胞活化性受体NKp46显著升高(P0.05)，IT组表达NKp46、NKp30均也升高(P0.05)，而IA组抑制性受体NKG2A表达下降(P0.05)，IT组则无明显差异；ACLF组表达活化性受体和抑制性受体水平较健康对照均无明显差异；各组间比较也无明显差异。（3）与健康对照相比，慢性HBV感染患者NK细胞分泌细胞因子IFN-γ均较低(P0.001)，细胞因子TNF-α与健康对照相比无明显差别；各组间比较IFN-γ分泌量均无明显差异，IA、IT组分泌TNF-α水平较ACLF组高，差异具有统计学意义(P0.05)。（4）与健康对照相比，慢性HBV感染患者NK细胞分泌颗粒酶B水平均较低，其中IA组和ACLF组与健康对照相比差异具有统计学意义(P0.05)，