三氧化二砷调控hl-60细胞htert基因启动子及相关转录因子nf-κb机制研究-mechanism of arsenic trioxide regulating htert gene promoter and related transcription factor nf - κ b in hl - 60 cells.docxVIP

三氧化二砷调控HL-60细胞hTERT基因启动子及相关转录因子NF-κB机制研究摘要目的：研究三氧化二砷(arsenictrioxide，As2O3)对HL-60细胞人端粒酶逆转录酶（Humantelomerasereversetranscriptase,hTERT）基因启动子及相关转录因子NF-κB的作用机制。方法：1.将不同浓度的As2O3作用HL-60细胞，利用实时荧光定量PCR技术和Westernblotting技术分别检测hTERT、NF-κB在mRNA水平和蛋白水平上的变化2.利用RNAi技术干扰NF-κB基因表达，利用实时荧光定量PCR技术和Westernblotting技术，分别检测HL-60细胞hTERT、NF-κB在mRNA水平和蛋白水平的表达变化，同时利用CCK-8分析法，流式细胞术分别检测HL-60细胞的增殖和凋亡变化。结果：1.不同浓度的As2O3作用于HL-60细胞后，hTERT、NF-κB在mRNA和蛋白水平上的表达受到明显抑制(P0.01)。2.沉默转录因子NF-κB的表达，hTERT、NF-κB在mRNA和蛋白水平的表达受到明显抑制(P0.01)。3.沉默转录因子NF-κB的表达，有效的抑制HL-60细胞的增殖(P0.01)，以干扰48h最为显著。4.沉默转录因子NF-κB的表达，有效的促进HL-60细胞的凋亡(P0.01)。结论：1.不同浓度的As2O3作用于HL-60细胞后,可促进HL-60细胞凋亡，并呈一定的量效关系。2.沉默转录因子NF-κB的表达可促进HL-60细胞的凋亡，抑制其增殖。关键词：三氧化二砷；hTERT基因；启动子；NF-κBStudyontheMechanismofArsenicTrioxideonRegulationofhTERTGenePromoterbindingrelated-transcriptionfactorsinHL-60CellsAbstractObjective:Tostudythemechanismofarsenictrioxide(As2O3)onHL-60cellshTERTgenepromoterandrelatedtranscriptionfactorNF-κB。Method:1.ApplyingdifferentconcentrationsofAs2O3onHL-60cells,byusingReal-timePCRandWesternblottingmethodstodetectrespectivelythechangeofhTERTandNF-κBonmRNAandtheproteinlevel.2.,weusedReal-timePCRandWesternblottingmethodstodetectrespectivelythechangeofhTERTandNF-κBonmRNAandtheproteinlevelSimultaneouslyusedCCK-8analysismethodandFlowcytometrytodetectrespectivelyproliferationactivityandapoptosischangeofHL-60cellafterusingRNAitechnologyinterferingNF-κBexpression.Results:1.AfterdifferentconcentrationsofAs2O3areappliedtoHL-60cells,hTERTandNF-κBexpressionwassignificantlyinhibitedonmRNAandproteinlevel(P0.01).2.SilencetheexpressionofthetranscriptionfactorNF-κB,andthenhTERT,NF-κBwassignificantlyinhibitedonmRNAandproteinlevels(P0.01).3.SilencetheexpressionofthetranscriptionfactorNF-κBcaneffectivelyinhibittheproliferationofHL-60cellsobviouslydecreased(P0.01),themostsignificantin48hafterinterfering.4.SilencetheexpressionofthetranscriptionfactorNF-κBcaneffectivetopromoteapoptosisofHL-60cells(P0.01).Conclusions:1.AfterbeingappliedtoHL-60cells,differentconcentr