神经抑制污染物连续暴露下大型溞daphnia magna外在行为响应及内在机制研究-study on external behavioral response and internal mechanism of daphnia magna after continuous exposure to neuroleptic pollutants.docxVIP

I I II II 目录 目录 I 摘要 I ABSTRACT III 第一章 文献综述 1 1.1 水体污染现状 1 1.1.1 世界水体污染现状1 1.1.2 我国水体污染现状 2 1.2 农药污染 4 1.2.1 农药影响水生生物体内的途径 5 1.2.2 农药对水生生物的影响 6 1.3 受测污染物、受试生物及生物指示物概述 7 1.3.1 受测污染物7 1.3.2 受试生物10 1.3.3 生物标志物10 1.4 污染物暴露下的大型溞外在行为响应12 1.4.1 水质监测技术12 1.4.2 生物行为响应机制研究13 1.5 本研究立题依据、研究内容及意义 14 1.5.1 立题依据14 1.5.2 研究内容及意义15 第二章 敌敌畏、灭多威及溴氰菊酯对大型溞的急性毒性效应 17 2.1 研究目的 17 2.2 材料与方法 17 2.2.1 生物培养 17 2.2.2 实验药物 17 2.2.3 实验设计 17 2.2.4 统计方法 18 2.3 结果与分析 18 2.4 结论 19 第三章 体内抑制实验中污染物对大型溞 ACHE 活性的影响 21 3.1 研究目的 21 3.2 材料与方法 21 3.2.1 药品器材 21 3.2.2 实验材料 21 3.2.3 取样 22 3.2.4 粗酶的制备 22 3.2.5 AChE 活性测定 22 3.3 结果与分析 23 3.3.1 体内实验中敌敌畏对 AChE 活性的影响 23 3.3.2 体内实验中灭多威对 AChE 活性的影响 24 3.3.3 体内实验中溴氰菊酯对 AChE 活性的影响 24 3.3.4 分析讨论 25 3.4 结论 27 第四章 体外抑制实验中污染物对大型溞 ACHE 活性的影响 29 4.1 研究目的 29 4.2 材料方法 29 4.2.1 药品器材 29 4.2.2 实验材料 29 4.2.3 取样 29 4.2.4 粗酶的制备 30 4.2.5 AChE 活性测定 30 4.3 结果分析 30 4.4 结论 33 结论 35 参考文献 37 致谢 45 攻读硕士期间发表的论文47 神经抑制污染物连续暴露下大型溞(Daphnia magna)外在行 为响应及内在机制研究 摘要 水体污染严重影响水生生态系统稳定及威胁人类的健康安全。利用水生生物 行为变化监测水体环境可以实现对水体环境质量的实时、快速的监测。水生生物 在环境污染物暴露下，对水生生物产生的毒性效应会表现在五个水平上，分别是 分子水平、细胞水平、组织水平、个体水平和群体水平。通常水生动物在个体水 平上表现为游泳能力、回避行为、条件反射能力等各种行为的变化。个体水平上 生物的行为强度与暴露污染物的相对效应浓度和暴露的时间有着明显的相关性。 这种行为变化与环境压力大小直接相关，其在一定环境压力下的行为变化与环境 压力阈模型(Stepwise Stress Model, SSM)所述的生物行为环境模型相一致。环境 毒物对生物个体影响，首先作用于生物机体的相关生物指示物(酶或蛋白)。因此， 生物行为强度变化的同时，生物体内相应的标志物必然也做出了相应的反应。 本实验研究了体内抑制和体外抑制试验下，有机磷类农药敌敌畏、氨基甲酸 酯类农药灭多威以及拟除虫菊酯类农药溴氰菊酯分别在 2TU 和 5TU 浓度下的指 示生物大型溞(Daphnia magna)的生物标志物乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的变化趋 势。结合生物的环境压力阈模型，分析大型溞的乙酰胆碱酯酶活性的变化规律， 探索大型溞对受试污染物的内在响应机制。 通过实验发现大型溞的 AChE 活性与暴露农药的浓度和暴露时间有明显的相 关性，其中体外抑制试验中，AChE 活性还与农药的毒理机制有关： 1. 24 h 急性毒性试验结果表明：不同污染物对大型溞的毒力大小有所差异， 敌敌畏、灭多威和溴氰菊酯对 24~48 h 大型溞的 24 h-LC50 分别为 0.746 μg/L、 9.829 μg/L 和 6.680 μg/L。大型溞的死亡率与污染物的浓度呈正相关性，具有明 显的剂量－效应关系。大型溞在受到不同种类环境污染物的刺激时，均会表现出 明显的行为变化，出现回避行为，这与污染物的致毒机理无直接关系。 2. 敌敌畏、灭多威以及溴氰菊酯在体内抑制试验中对大型溞 AChE 活性具 有明显的抑制作用。整体上，随着暴露时间的增加，实验组大型溞的 AChE 活性 呈下降趋势明显低于空白对照组，且高浓度组(5 TU)污染物对酶活性的抑制作用 明显高于低浓度组(2 TU)；在一定浓度污染物暴露中，AChE 活性的抑制率随时 间增加呈上升趋势。体内抑制试验由于受生物体内代谢的影响，AChE 活性在某 些时间会出现回升