芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及il-13stat6信号转导通路的影响-effects of paeoniflorin on hepatic fibrosis and il - 13 stat 6 signal transduction pathway in mice with schistosomiasis japonica.docxVIP

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2018-07-31 发布于上海
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芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及il-13stat6信号转导通路的影响-effects of paeoniflorin on hepatic fibrosis and il - 13 stat 6 signal transduction pathway in mice with schistosomiasis japonica.docx

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芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及il-13stat6信号转导通路的影响-effects of paeoniflorin on hepatic fibrosis and il - 13 stat 6 signal transduction pathway in mice with schistosomiasis japonica

英文缩略词对照表英文缩写A英文全文absorbance中文全名吸光度CCK-8ColⅠColⅠα1ColⅢColⅢα1DABDMEMECMEBFBSGAPDHHRPHSCIL-13IL-13Rα1cellcountingkit-8collagentypeⅠprocollagen,typeⅠ,alpha1collagentypeⅢprocollagen,typeⅢ,alpha1diaminobenzidinedulbecco’smodifiedeaglesmediumextracellularmatrixethidiumbromidefetalbovineserumglyceraldehydes-3-phosphatedehydrogenasehorseradishperoxidasehepaticstellatecellInterleukin-13interleukin-13receptorα1细胞计数试剂盒-8Ⅰ型胶原Ⅰ型α1前胶原Ⅲ型胶原Ⅲ型α1前胶原浓缩型二氨基联苯胺DMEM培养液细胞外基质溴化乙锭胎牛血清甘油醛-3-磷酸脱氢酶辣根过氧化物酶肝星状细胞白细胞介素13白细胞介素13受体α1IL-13Rα2interleukin-13receptorα2白细胞介素13受体α2LDHlactatedehydrogenase乳酸脱氢酶ODopticaldensity光密度PAEpaeoniflorin芍药苷PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PDGFplateletderivedgrowthfactor血小板衍生生长因子PMSFphenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物RT-PCRreversetranscriptasepolymerasechainreaction反转录多聚酶链反应rIL-13recombinantInterleukin-13重组白细胞介素13SEAsolubleeggantigen可溶性虫卵抗原α-SMAα-smoothmuscleactinα-平滑肌肌动蛋白STAT6signaltransducersandactivatorsoftransduction6信号转导和转录激活因子6TGFβ1transforminggrowthfactorbeta1转移生长因子β1芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及IL-13/STAT6信号转导通路的影响中文摘要血吸虫病是发展中国家主要疾病之一。血吸虫病主要死因是肝虫卵肉芽肿以及继发性的肝纤维化。研究表明，感染血吸虫经杀虫治疗后，未成熟虫卵仍可继续发育，同时血吸虫虫卵肉芽肿引起的免疫反应及纤维化仍在继续，而且，一旦肝脏纤维化达到一定程度，即使去除了诱因，纤维化仍将继续发展。因此，如何在肉芽肿形成阶段以及肝纤维化早期，用药物干预、预防其发展，是继杀虫治疗后另一个控制疾病发展的关键。然而至今仍无高效低毒的药物用于血吸虫性肝纤维化的治疗。目的：研究PAE对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及IL-13/STAT6信号转导通路的影响方法：用血吸虫尾蚴经皮肤感染BALB/c小鼠，制作血吸虫病小鼠模型。从感染后12天开始，药物组每天经胃灌注PAE[0.2ml，60mg/(kg·d)×30d]，正常和模型组灌注0.5％羧甲基纤维素钠。感染后第42天起所有各组经胃灌注吡喹酮[500mg/(kg·d)×2d]以杀虫。在感染后第8、12周末，分别处死相应各组小鼠，取血及肝脏，分别用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量；碱裂解法测量肝脏HYP含量；苏木精-伊红(HE)和Masson胶原纤维染色法计算肝虫卵性肉芽肿面积和评价肝纤维化程度；免疫组化染色观察α-SMA、IL-13、STAT6、IL-13Rα1的表达情况；RT-PCR检测肝脏组织Col–Ⅰ、Col-ⅢRNA的表达情况。此外在体外，观察rIL-13、PAE对小鼠3T3细胞增殖的影响，以及PAE对rIL-13对细胞增殖作用的影响；rIL-13作用于细胞后，加PAE干预，碱裂解法测其上清HYP的含量；Westernblotting分析α-SMA、IL-13Rα1和STAT6的表达情况；RT-PCR检测细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、IL-13Rα1、STAT6的RNA水平。结果：在小鼠体内模型中，感染后第8周和12周时，模型组小鼠血清HA水平和肝脏HYP水平显著高于正常组和药物组(P0.01)；肝脏虫卵肉芽肿面积和纤维化程度显著高于药物组（P0.01）；肝脏α-SMA阳性细胞的表达强度显著高于正常组和药物组（P0.01）；肝脏IL-13表达水平显著高于药物组（P0.01）；STAT6、IL-13Rα1表达水平感染后第8周模型组显著高于药物组，而第12周无明显变化；肝脏Col-Ⅰ、Col-ⅢRNA水