季也蒙毕赤酵母ypy17产脂肪酶条件的优化.docVIP

季也蒙毕赤酵母ypy17产脂肪酶条件的优化 　　摘要：从海南洋浦近海岸分离到１株产脂肪酶的酵母菌株，经鉴定为季也蒙毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ），利用Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ设计对发酵条件进行了筛选。结果表明，橄榄油、初始ｐＨ值和Ｋ２ＨＰＯ４浓度对脂肪酶生产具有显著的影响；利用响应面法对３个因子进行了优化，获得了最佳发酵条件为橄榄油３１．５７ ｇ／Ｌ，硫酸铵 １０.00 ｇ／Ｌ，ＮａＣｌ ３０.00 ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰＯ４ １．１６ ｇ／Ｌ，初始ｐＨ值７．３0，２８ ℃培养７２ ｈ，脂肪酶活力达到１８．２0 Ｕ／ｍＬ。 　　关键词：季也蒙毕赤酵母；脂肪酶；Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ设计；响应面法 　　中图分类号：Ｑ９３９．９７文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2432-03 　　 　　Condition Optimization of Lipase Production from Pichia guilliermondii ypy17 　　 　　ＬＩ Ｘｉａｏ－ｙｕ１，２，ＬＵＯ Ｙａｎ－ｐｉｎｇ１，２，ＬＩＵ Ｚｈｉ－ｑｉａｎｇ１，２，ＱＩＵ Ｂｏ２ 　　（１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ （Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｈａｉｋｏｕ ５７０２２８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｄａｎｚｈｏｕ ５７１７３７， Ｈａｉｎａｎ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｌｉｐａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｙｅａｓｔ Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ｙｐｙ１７ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｏａｓｔａｌ ｗａｔｅｒ ｏｆ Ｙａｎｇｐｕ ｉｎ Ｈａｉｎａｎ． Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ） ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｌｉｐａｓｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ， ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ ａｎｄ Ｋ２ＨＰＯ４ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ influencing ｌｉｐａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ ３１．５７ ｇ／Ｌ， （ＮＨ４）２ＳＯ４ １０.00 ｇ／Ｌ， ＮａＣｌ ３０.00 ｇ／Ｌ， Ｋ２ＨＰＯ４ １．１６ ｇ／Ｌ， ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ ７．３0． Ａｆｔｅｒ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｌｉｐａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ １８．２0 Ｕ／ｍＬ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ； ｌｉｐａｓｅ； Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ ｄｅｓｉｇｎ； ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ 　　 　　脂肪酶是指可以催化三脂酰甘油水解产生甘油和游离脂肪酸或催化甘油与长链脂肪酸合成酯的酶［１］。脂肪酶广泛存在于自然界中，但是仅仅微生物产生的脂肪酶具有生产应用价值，因为微生物产生的脂肪酶产量高，而且功能多样，在油脂水解、食品加工、化妆品、医药、化工等工业领域中具有广泛的应用，已成为继蛋白酶、淀粉酶之后跃居世界工业酶制剂市场销量第三位的酶种，具有良好的发展和应用前景［１］。许多微生物都可以产生脂肪酶，在陆地酵母中，现已发现褶皱假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）、热带假丝酵母（Ｃ． ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、大西洋假丝酵母（Ｃ． ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）、柱状假丝酵母（Ｃ． ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、近平滑假丝酵母（Ｃ． ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、粗状假丝酵母（Ｃ． ｖａｌｉｄａ）、解脂耶罗维亚酵母（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、粘红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ）、墨西哥毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｍａｘｉｃａｎａ）、森林毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｓｉｌｖｉｃｏｌａ）、木糖毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｘｙｌｏｓａ）、博丁尼毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｂｕｒｔｏｎｉｉ）等［２］。目前用于工业生产脂肪酶的酵母菌主要有褶皱假丝酵母（Ｃ． ｒｕｇｏｓａ）和大西洋假丝酵母（Ｃ． ａｎｔａｒｃｔｉｃａ