乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠β2ar-β-arrestin2-nf-κbp65stat6信号转导通路的影响-effects of wumei pill on β 2ar - β - arrastin 2 - nf - κ bp 65 stat 6 signal transduction pathway in ulcerative colitis rats.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日前言溃疡性结肠炎(以下简称UC)是慢性炎症性肠病的一种,其确切的发病原因和机制还不明确,是发生于遗传易感个体的异常免疫应答反应,也是环境、微生物及肠道免疫系统相互作用的结果。近年来在炎症性肠病发病机制的研究主要集中在免疫方面,在炎性消化道粘膜中存在的大量单核细胞及有活性的巨噬细胞是细胞因子的主要来源,炎症反应细胞因子如IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IFN、TNF等,抗炎细胞因子如IL-4、IL-10、IL-13等均与UC的发病及病程进展有关。本实验主要研究UC大鼠结肠和脾脏组织中?2AR、?-arrestin2，NF-κBP65、STAT6的表达。许多因子的产生可能与NF-κB的信号转导和转录激活因子有关。?2AR介导的信号通路和NF-κB之间存在重要的交叉会话。?2AR通路中的重要信号分子?-arrestin2，也是另一个能够调控NF-κB的活性和靶基因表达的重要分子，可介导UC的发病。因此通过本实验我们可以发现?2AR-?-arrestin2-NF-κBP65/STAT6通路在UC的发病中起关键作用，并可以用于指导临床治疗。研究发现乌梅丸和美莎拉嗪均可以上调?2AR、?-arrestin2的表达水平，并使得NF-κBP65、STAT6的表达水平下降，起到对免疫功能的调节和对结肠黏膜的保护作用。二者的表达水平在统计学上无显著差异。乌梅丸和美莎拉嗪均可以通过?2AR-?-arrestin2-NF-κBP65/STAT6通路影响大鼠免疫功能的调节并保护肠粘膜。本研究发现，乌梅丸和美莎拉嗪还可以改善腹痛、腹泻、粘液脓血便、里急后重等临床症状，而达到治疗的目的。第一部分UC大鼠?2AR-?-arrestin2-NF-κBp65的表达及乌梅丸的干预作用1试剂和材料1.1建立模型的试剂和材料32只雄性SPF级SD大鼠，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心，体重300±50g；2，4，6-三硝基苯磺酸（5％W/V）购自Sigma公司。美莎拉嗪（0.5g/袋）购自武汉协和医院，乌梅丸各味中药生药购自武汉协和医院，在湖北省中医院药剂科煎煮浓缩消毒后备用。1.2westernblot法检测UC大鼠脾脏?2AR、?-arrestin2、NF-κBP65的试剂和材料抗体：一抗分别用Rabbit?2ARantibody（北京bioss,BS-0947R，1:100）；Rabbitβ-arrestin2antibody（北京bioss,BS-1332R，1:100）；MouseNF-κBp65antibody（SANTA,sc-8008，1:200）；MouseMouseGAPDHantibody（ProMab,Mab-2005079，1:8000）。二抗用GoatAntiRabbitIgG/HRP（1:40,000）试剂：30%丙烯酰胺溶液、10%过硫酸铵、TEMED（上海生工）、Tris-Base、10%SD（SIGMA）；RIPA（ProMab,SJ-200501）；1%BSA-PBS（含0.05%TWEEN20）稀释液。设备：电泳电源、电泳仪、NC膜、滤纸1.3免疫组化法检测UC大鼠结肠组织?2AR、?-arrestin2、NF-κBP65的试剂和材料不锈钢高压锅和电炉、医用微波炉、水浴箱、冰箱、湿盒、耐高温塑料切片架、可调微量移液器、定时器、pH计；PBS(磷酸盐缓冲液pH7.2)；柠檬酸盐缓冲液CB（pH6.0）；免疫组化试剂盒（KIT-5020，迈新公司，羊抗鼠/兔）；抗体：ADR?2:BS-0947R(1:200)兔抗；NF-κB:SC-8008(1:200)鼠抗；?-arrestin2:BS-1332R(1:200)兔抗2方法2.1模型建立及药物干预将32只大鼠随机分为四组：空白对照组、模型组、美莎拉嗪西药组和乌梅丸中药组，每组8只。除空白对照组外，其他组大鼠均在禁食不禁饮24小时