皖南黄肉种鸡alv-j与rev的共感染及其分子变异分析-coinfection and molecular variation analysis of alv - j and rev in southern anhui yellow meat breeding chickens.docxVIP

山东农业大学硕士学位论文 山东农业大学硕士学位论文 地方品种皖南黄肉种鸡 地方品种皖南黄肉种鸡 ALV-J 与 REV 的共感染及其分子变异分析 PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 2 中文摘要 J 亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis virus subgroup J）和禽网状内皮增生病病毒 （Reticuloendotheliosis virus）都是能引起禽类肿瘤和免疫抑制的疾病。这类疾病虽然不 一定直接导致禽的死亡，但他们能降低鸡体对其他疾病的抵抗力，进而给养殖业带来很 大的经济损失。ALV-J 是上世纪 80 年代末 Payne L N 等首先从肉用型鸡中分离鉴定出 来的禽白血病病毒新的亚群,所致肿瘤多为骨髓样细胞瘤。REV 同样作为反转录病毒感 染自然宿主后，大多情况下也不会对机体细胞造成损害，但某些情况下会导致细胞转化 （瘤细胞化）或引起细胞病变。 REV 和 ALV-J 已在包括中国在内的世界范围内同时流行，并且呈现与其它致瘤性病 毒如马立克氏病病毒（MDV）等共感染或多重感染的流行特点，并且 REV 与 ALV-J 无论 人工混合感染还是自然混合感染的病例均出现非典型的病变，其病变程度和死亡率较任 何单一病毒的感染要严重的多，且在其感染期间致使鸡体极易受到其它病原的侵袭并常 常伴有其它病原的共感染以及多重感染，进而给养禽业带来了巨大的损失，是危害养禽 业的主要病原体之一。因此，对 REV 与 ALV-J 共感染相关的研究越深入越有利于实践生 产中对该病的预防和治疗。 近年来, 安徽许多鸡场地方品种皖南黄肉种鸡先后发生了病因不名的肿瘤性疾病, 其发病率和死亡率比以前的肿瘤性疾病显著提高, 而且根据病理检查很难作出确切的 鉴别诊断。为了弄清楚这种肿瘤病的病因和发病机理, 我们采集了疑似发病皖南黄肉种 鸡样本，对此进行了一系列实验室的诊断,结果从发生肿瘤病的病鸡体内同时分离到了 ALV-J 和禽网状内皮组织增生症病毒(REV )。为了探讨地方品种皖南黄肉种鸡群中禽网 状内皮增生病病毒（REV）与 ALV-J 的感染状态，对 ALV-J 分离株的囊膜糖蛋白基因（env） 和非编码区 3’UTR 序列进行分子变异分析。 本实验首先取 7 只 300d 皖南黄发病鸡分别进行病理组织学、细胞培养后的 IFA 检 测。参照 GenBank 上发表的 ALV-J 原型毒株 HPRS-103、ALV-A 原型毒株 ALV-RSA、ALV-B 毒株和 REV 毒株 HA9901 序列，设计合成用于扩增 ALV-env/LTR 的引物，特异性引物序 列进行 PCR 鉴别诊断。结果表明，7 只皖南黄肉种鸡有 6 只同时感染 ALV-J 与 REV，而 ALV-A 和 ALV-B 为阴性。取 2 个 ALV-J 分离株 WN100401 和 WN100402 进行 env 基因与非 编码区 3’UTR 基因扩增与序列分析，结果显示两分离株的 env 全长均为 1704 bp， gp85 与 12 株国内外参考株之间的氨基酸同源性在 89.2%～93.7%之间，跟广东株 GD051001 的同源性最高 93.7%，gp37 同源性在 88.9%～93.4%之间；3’UTR 全长均为 400bp，3’ UTR 区段 rTM 和 E 元件同发生双缺失；与近十年国内来自白羽肉鸡的 ALV-J 分离株，所 有分离株 3’UTR-E 元件基因缺失表现为共性，但 3’UTR-rTM 基因缺失呈现多样性；作 为保守序列 5’LTR 较之前所有国内外毒株有 11 bp 缺失。本研究发现，地方品种皖南 黄肉种鸡群存在 REV 与 ALV-J 的共感染，这已成为该地方品种鸡群肿瘤高发率的重要原 因；多区段的基因缺失表明 ALV-J 在地方品种鸡可能已出现新的变异趋势，但是否与高 肿瘤发生率有关有待进一步探讨。 关键词：皖南黄肉种鸡； J 亚群禽白血病病毒； 共感染； 遗传变异 Identification of co-infection of ALV-J and REV and Molecular characterization of the two viruses isolated from Wannan Yellow feather broilers Abstract Subgroup J avian leukosis virus (Avian Leukosis virus subgroup J) and the avian reticuloendothelial hyperplasia virus (Reticuloendotheliosis virus) can cause poultry diseases a