5―氮杂―2―脱氧胞嘧啶核苷对肿瘤细胞化疗敏感性作用研究.docVIP

5―氮杂―2―脱氧胞嘧啶核苷对肿瘤细胞化疗敏感性作用研究 　　目前，许多肿瘤常规化疗效果差，预后不良是困扰临床的重要难题，而肿瘤多药耐药性（MDR）则是肿瘤化疗失败的关键因素。经治疗后，残存的肿瘤干细胞耐药性形成，常导致对某些药物治疗敏感性降低，并引起肿瘤复发甚至转移，因此MDR已成为当今医学界研究的热点[1]。 　　国内外均有大量文献表明5-氮杂-2-脱氧胞嘧啶核苷能增强化疗药物对肿瘤细胞的作用，即降低肿瘤细胞的耐药性[2]。虽然早期应用于血液病，但在实体肿瘤中也有不同的作用机制来增强传统化疗药物的敏感性，为临床上对抗肿瘤多药耐药提供了新的思路。 　　1 5-氮杂-2-脱氧胞嘧啶核苷（地西他滨）的发展历史 　　5-氮杂胞苷、5-氮杂-2脱氧胞苷（地西他滨）最广泛的应用于DNA的去甲基化。在体内外，脱甲基作用导致遗传学上沉默的肿瘤抑制因子惯序地激活。尽管地西他滨作有抗白血病的作用被发现已有40年历史，它在恶性血液病的治疗潜力仅仅最近才被批准用于高风险的骨髓增生异常综合征以及作为年龄65岁、非加强化疗的急性髓性白血病患者的一线用药。一些临床试验显示小剂量地西他滨在治疗慢性粒细胞白血病和血红蛋白病也有潜力，然而对实体肿瘤的疗效有限。临床反应似乎在表观遗传学、细胞周期阻滞和/或细胞凋亡都有表现。最近的和进行中的临床试验探讨新的给药方案、给药途径以及地西他滨与其他药物的配伍，这些药物包括组蛋白脱乙酰酶抑制剂[3]。 　　2 5-氮杂-2-脱氧胞嘧啶核苷（地西他滨）作用机制 　　5-氮杂-2-脱氧胞嘧啶核苷（5-aza-2-deoxycytidine，5-Aza-cdR）即地西他滨（decitabine）是一种天然的脱氧胞苷酸的腺苷类似物。在细胞内，经磷酸化后与肿瘤内的胞嘧啶竞争，以共价键与DNA甲基化转移酶结合，使DNA甲基化转移酶失活，阻断细胞周期，抑制细胞增殖，从而发挥抗肿瘤的作用。临床研究发现小剂量的地西他滨对肿瘤的治疗有效，相对的实验室研究认为小地西他滨使DNA甲基化转移酶失活，诱导肿瘤细胞向正常细胞分化[4]。 　　目前肿瘤的耐药性是临床上的难题，也是肿瘤患者预后不良的一个重要因素[5]。在遗传学上，存在基因改变。而在表观遗传学上，DNA序列没有改变，只是基因被甲基化修饰，抑制基因的表达[6]。在哺乳动物基因组中，胞嘧啶含量仅为1%。这是因为胞嘧啶容易被甲基化成为5-甲基胞嘧啶。当癌基因低甲基化、抑癌基因高甲基化时，癌基因过度表达，导致肿瘤的发生[7]。已有大量文献表明5-氮杂-2-脱氧胞嘧啶核苷能增强化疗药物对肿瘤细胞的作用，即降低肿瘤细胞的耐药性，现大致综述如下。 　　2.1肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。目前没有有效地药物干预能治疗肝癌[8]。大多数恶性肿瘤表现出异常基因启动子区域的甲基化导致基因功能的丧失[9]。去甲基化试剂5-Aza-CdR可以重新激活MAT1A基因表达和抑制MAT2A基因表达，诱导人肝癌细胞生成相同的产物，扭转MAT1A启动子的甲基化，从而它抑制肝癌细胞的生长。研究结果可以提供一个机制，通过5-Aza-CdR对肝癌细胞发挥持续增长的抑制作用[10]。在肝癌细胞中，丢失了表观遗传学修饰的癌细胞对放化疗缺乏应答。甲硫氨酸腺苷转移酶1A在肝癌细胞中是灭活的，它的灭活可能是基因的表观遗传学改变，这些改变中包括启动子甲基化。因此，药物解放表观遗传学的抑制作用可能逆转这个过程[11]。Liu，W.J研究了去甲基化试剂5-氮杂-2脱氧胞苷在肝癌细胞Huh7细胞系中对MAT1A基因表达、DNA甲基化和腺苷甲硫氨酸产生的影响。我们发现在经5-氮杂-2脱氧胞苷干预的肝癌细胞Huh7细胞系中，MAT1A mRNA和蛋白的表达激活，启动子甲基化也逆转了。同时也发现经5-氮杂-2脱氧胞苷处理后的肝癌细胞Huh7细胞系中，MAT2A mRNA和蛋白的表达显著减少，腺苷甲硫氨酸产物也显著减少。然而，5-氮杂-2脱氧胞苷对MAT2A甲基化没有作用。此外，5-氮杂-2脱氧胞苷通过下调Bcl-2、上调Bax、caspase-3来抑制肝癌Huh7细胞系的增殖、诱导凋亡。我们的观察值显示5-氮杂-2脱氧胞苷在肝癌Huh7细胞系中通过改变基因的表观遗传增加甲硫氨酸腺苷转移酶1A的表达以及诱导活性腺苷甲硫氨酸的产生发挥了抗肿瘤作用[12]。 　　2.2有前期的实验室和临床数据显示使DNA去甲基化的药物有潜在地减少铂抵抗型卵巢癌的发展[13]。为此，Glasspool，R.M测试了DNA低甲基化试剂5-氮杂-2脱氧胞苷（地西他滨）可逆转卡铂抵抗的复发性卵巢癌的女患者这个假说。在卵巢癌中，mir-130b基因表达水平的下调与临床分期达到III-IV期和组织学分化较差的肿瘤有关。mir-130b的表达能够抑制多药耐药卵巢癌细