Apelin.13对离体大鼠主动脉环舒张作用实验研究.docVIP

Apelin.13对离体大鼠主动脉环舒张作用实验研究 　　[摘要] 目的研究新发现的小分子活性肽Apelin-13对离体大鼠主动脉环的舒张作用及其可能的作用途径。方法采用累计加药法，检测Apdm-13对去甲肾上腺素(NE)预收缩的内皮完整的胸主动脉环及去内皮后胸主动脉环张力的变化。结果　浓度范围内对内皮完整的离体大鼠胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用，最大舒张率为(44.43+11.1)％，其对内皮完整的血管的舒张作用显著大于去内皮血管(P0.05)，Apelin-13对去内皮的主动脉环的最大舒张率仅为(6.36±2.40)％。结论Apelin-13具有显著的舒张主动脉的作用，其舒张作用依赖于内皮的完整性。 　　[关键词]Ape]in；主动脉；舒张作用；内皮；大鼠 　　中图分类号：R331.3　3 文献标识码：A 文章编号：1009-816X(2007)06-0388-03 　　 　　Apelin是近年新发现的小分子活性肽，为G蛋白偶联受体一血管紧张素Ⅱl型受体相关蛋白(putativereceptor protein related t0 the anglotensinⅡtype 1 recep―tor，APJ)的内源性配体。研究发现Apelin及其受体APJ广泛分布于心血管组织，参与正常心血管组织的胚胎发育，对正常和病变心血管都具有正性肌力、舒张血管、降低血压的保护作用。给麻醉的正常大鼠静脉注射Apelin可导致平均动脉压迅速降低，并且发现给清醒的大鼠静脉注射Apelin后亦引起降压效应，而Apelin的降压作用可被L-NAME阻断。Lee，D.K等还发现Apelin对自发性高血压大鼠也有降低血压的作用。但是其降低血压、舒张血管的机制尚未完全清楚。本实验旨在通过观察Apdln―13对离体大鼠主动脉环的影响，探讨Apelin-13的舒张血管作用及其机制。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1药品与试剂：Apelin-13购自美国Phoenix Dhamla．ceuficals Pharmaceuticals hc；乙酰胆碱(acetyleholine，ACh)购自Sienna公司；去甲肾上腺素(Norepinephfine，NE)购自上海禾丰制药有限公司。产品批号：6A11005。Krebs-Henseleit(K-H)液(mmol?L)：含NaCll20，KCl5.5，Mgcl26H20 1.2，Nal-12P04 1.2，NaH―Cq20，EDTA-Na20.03，Dextrosel0，pH7.2―7.4。 　　 　　1.2胸主动脉环的制备与稳定：本实验采用健康雄性SD大鼠12只，体重150～18，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：sCXK(沪)2003―0003。大鼠用戊巴比妥钠(35me／kg，i.p．)麻醉，左颈总动脉插管放血处死动物，迅速取胸主动脉，置于通以95％02+5％c02混合气体的K―H液中。小心去除周围结缔组织后将血管剪成约3～4ram宽的血管环。避免过度牵拉，以保护内皮的完整。根据实验需要，去除血管内皮时，用棉签磨擦血管环内表面以去除内皮细胞。然后，将血管环放入含Kreb’s液的浴槽内，持续通以95％02+5％c02的混合气体，将静息张力调至2g。在37℃下稳定90min，期间每15rain换液一次。 　　血管内皮的完整性用ACh检验。待血管稳定后换液一次，再向浴槽中加入1pmol?L11的NE使血管收缩，收缩达到峰值后稳定15min，然后加入lOanol?L11的Ach观察能否引起血管舒张，若使预收缩的血管环舒张60％－80％则可认为内皮完整；如不产生舒张或舒张幅度小于10％，则视为去内皮成功。 　　以NE(1gmol?L11)诱发最大收缩幅度为100％，以加入药物后的血管张力幅度与NE诱发最大收缩幅度之间的比率反映血管张力的变化。 　　 　　1.3实验分组及处理： 　　1.3.1 Apelin对内皮完整的主动脉张力的影响：不同浓度Apelin对NE预收缩的胸主动脉环张力的影响组(n=12)：血管环在2g最适静息张力下平衡90min后加入NE(1tmol?L11)，待血管收缩稳定后，向浴槽内依次加入浓度分别为10-1、10-10、10-9、lO-9、10一7tool?L―iApelin。记录血管的张力变化。 　　1.3.2 Alin对去内皮完整的主动脉张力的影响(n=12)：NE预收缩的去内皮主动脉环，向浴槽内依次加入浓度分别为10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol?L一1Allin，记录血管的张力变化。 　　 　　1.4数据处理：用不同浓度下的血管收缩值制备剂量一效应曲线，在每次实验中分别计算收缩舒张百分数，最后的值用