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ABCA1基因V825I多态性与腔隙性脑梗死合并高血压病相关性研究 　　摘要：目的 研究ABCA1基因V825I多态性与腔隙性脑梗死合并高血压病的关系。方法 采用PCRRFLP技术，以病例对照方式研究97例腔隙性脑梗死合并高血压病患者及129例正常对照，对ABCA1基因V825I多态进行检测,比较不同基因型与个体血脂水平及其与腔隙性脑梗死合并高血压病的易感性。结果 ABCA1基因V825I基因型频率和等位基因频率在病例组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)，对年龄、性别、血脂水平、吸烟等危险因素进行校正行Logistic回归分析发现，与VV基因型比较，Ⅱ基因型患病的风险显著降低（OR:0.31,95%CI:0.13～0.72）。结论 在中国福建汉族人群中ABCA1基因V825I多态性与腔隙性脑梗死合并高血压病有相关性，Ⅱ基因型具有保护作用。 　　关键词：ABCA1基因；V825I多态；腔隙性脑梗死；高血压病 　　中图分类号：R743 R544.1 R255.3 文献标识码：B 文章编号2012 　　 　　ATP结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter 1,ABCA1) 是一种整合膜蛋白,它以ATP为能源,促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出,后者结合到细胞表面的载脂蛋白A1（apoH??1),形成新生的高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)，参与胆固醇逆向转运而发挥抗动脉粥样硬化的作用。研究表明ABCA1基因变异导致HDLC缺陷伴早发动脉粥样硬化［1］??。近来有大量文献表明，ABCA1基因单核苷酸多态性(SNP)与血浆脂质水平和动脉粥样硬化易感性有着密切的相关性［25］??。V825I是ABCA1基因编码区17号外显子的一个SNP位点，在第六个跨膜结构的α螺旋中由GTC变异为ATC，可能对ABCA1蛋白活性产生影响。V825I与缺血性心脏病及血脂的研究较多，在不同的人群结果往往不一致［611］??，而且V825I在腔隙性脑梗死合并高血压病的研究尚未见报道。因此，本研究采用病例对照研究方式探讨V825I多态与腔隙性脑梗死合并高血压病的相关性。 　　1 资料与方法 　　1.1 研究对象 病例来源于2008年9月―2011年6月在福建中医药大学附属第二人民医院住院部和门诊的腔隙性脑梗死伴高血压病患者。病例组共97例，男61例,女36例；年龄48岁～83岁(67.7岁±10.5岁)。腔隙性脑梗死严格按照1990年脑血管病Ⅲ的标准诊断［12］??。所有病例都经磁共振成像（MRI）或CT平扫证实。对照组129例,为福建中医药大学附属第二人民医院体检中心的无高血压病及无心脑血管疾病人群，其中男77例,女52例，年龄43岁～80岁(59.2岁±9.6岁)。观察对象均排除肝、肾、内分泌等影响脂质代谢的疾病、心房纤颤、周围血管疾病、大动脉炎、血液病、结核、恶性肿瘤及入院前2周内使用降脂等药物者。在收集血液标本的同时, 收集每个研究对象详细的人口学资料。两组均为福建省汉族人，无血缘关系。以上研究对象均进行血糖、血脂、血压等检查，高血压病的诊断标准为血压≥140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），糖尿病的诊断标准为空腹血糖≥7.0 mmol/L或餐后2 h血糖≥11.1 mmol/L。 　　1.2 生化检测 空腹12 h后采取外周静脉血,分离血清。全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、三酰甘油 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、HDLC、apoA1及血糖。 　　1.3 基因组DNA提取和PCR扩增 空腹抽取静脉血 2 mL以ACD抗凝,以外周血基因组DNA提取试剂盒(QIAGENE)提取。反应使用9700型PCR扩增仪,体系25 μL。含有大约100 ng基因组DNA,50 pmol/μL上下游引物0.5 μL（引物：F 5’ gAgACTgACCAggAAATgg 3’R 5’ ATgCACTgCAgAgATTCTAg 3’）,20 mmol/L dNTP 0.5 μL,10×PCR缓冲液2.5 μL，TaqDNA聚合酶1.25 U，用去离子水补至25 μL。扩增程序为:94 ℃预变性2 min,然后94 ℃变性30 s，61 ℃退火45 s, 72 ℃延伸60 s,共30个循环；最后72 ℃延伸5 min。17号外显子V825I位点的PCR产物用限制性内切酶BsaI(NEB公司)于50 ℃酶切过夜，反应体系为20 μL:PCR反应产物8 μL,内切酶2 U，NEBuffer3 2 μL，去离子水补至20 μL。酶切产物在3%琼脂糖凝胶中进行电泳,溴乙啶染色,紫外灯下观察电泳结果并确定基因型，D2000有100bp到2000bp