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PEG―6000胁迫对枳壳种子萌发生理特性影响 　　摘要：【目的】PEG-6000胁迫两种枳壳种子，初探柑橘砧木抗旱机理。【方法】以绿衣枳壳和旺苍大叶枳的种子为试验材料，使用PEG-6000（0 %、12.5%、17.6%、 21.1%）模拟干旱胁迫，检测枳壳种子萌发过程中α-淀粉酶活性、SOD活性、POD活性、MDA含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白的变化情况。【结果】随着胁迫时间的延长，绿衣枳壳和旺苍大叶枳均呈现SOD酶和POD酶活性逐渐增加，MDA含量呈上升趋势；可溶性蛋白呈现先减少再升高的变化趋势，可溶性糖变化趋势较小，α-淀粉酶呈现先增加后减少的变化趋势。绿衣枳壳的SOD、POD、MAD、α-淀粉酶活性、可溶性蛋白含量均高于旺苍大叶枳，可溶性糖含量低于旺苍大叶枳。【结论】由此初步推断出绿衣枳壳较旺苍大叶枳抗旱，柑橘砧木可选绿衣枳壳。 　　关键词：枳壳；PEG-6000；种子萌发；抗旱性 　　中图分类号：S665.9 　　文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2015）10-0055-04 　　1 引言 　　我国柑橘种植面积和总产量均居世界首位，柑橘产业已成为我国南方主产区农村经济的一大支柱产业 [1]。由于我国南方栽培柑橘，出现灌溉不均一，偶遇自然灾害（旱、涝）导致柑橘减产，因此，筛选或培育抗旱性强，优质的柑橘砧木资源尤为重要。 　　聚乙二醇-6000（PEG）用于模拟土壤干旱来研究植物水份亏缺具有较高的实践价值[2]。PEG-6000不易自由通过植物细胞壁，不易渗入活细胞内，不会给植物内增加营养物质，无毒，但能使活细胞缓慢吸水等优点，而常被作为干旱胁迫的渗透胁迫剂[3]，已在苹果、香蕉、枣、樱桃、葡萄、柑橘等果树上广泛应用[4～8]。李志刚等人的研究芦笋在 PEG 模拟干旱条件下的生理生化变化[9]试验结果表明PEG可有效提高作物抗性功能表达。本试验以绿衣枳壳、旺苍大叶枳为试材，研究柑橘种子在不同浓度梯度PEG模拟干旱胁迫下萌发过程中生理特性的动态变化，为柑橘抗旱性鉴定和抗旱种质的筛选和利用提供理论依据。 　　2 材料与方法 　　2.1 供试材料 　　以绿衣枳壳、旺苍大叶枳种子为供试材料。绿衣枳壳采种地点为贵阳市花溪区；旺苍大叶枳种子来源于重庆农科院柑橘研究所，采种时间为2013年10月，试验时间为2014年2～4月。 　　2.2 试验处理方法 　　选择成熟、饱满且大小一致的种子，经0.50%的次氯酸钠消毒5 min ，蒸馏水冲洗干净，灭菌滤纸吸干种子表面水分后，均匀摆放在铺有2层滤纸的90 mm玻璃培养皿中，每皿30粒种子，分别加入6 mL不同水势的 PEG -6000溶液，依据 Burlyn[10]等的PEG-6000溶液配制公式，配成0%（为对照ck）、12.5%、17.6%、 21.1%的PEG-6000溶液，模拟干旱条件进行处理。绿衣枳壳的0 %、12.5%、17.6%、 21.1%处理分别命名为A1、A2、A3和A4；旺苍大叶枳的0 %、12.5%、17.6%、 21.1%处理分别命名为B1、B2、B3和B4；于25℃恒温培养箱内进行恒温培养，每处理设 3个重复。播种后0 d、5 d、10 d、15 d进行相关生理生化指标的测定。 　　2.3 指标测定及方法 　　α-淀粉酶、SOD、POD、MDA、可溶性糖和可溶性蛋白检测分别采用3，5-二硝基水杨酸比色法、氮蓝四唑（NBT）法、愈创木酚法、硫代巴比妥酸法、蒽酮比色法和考马斯亮蓝染色法，具体见雄庆娥编写的植物生理学实验教程[11]一书。 　　3 结果与分析 　　3.1 SOD酶活性的动态变化 　　SOD是植物体内重要的抗氧化保护酶，它直接影响着活性氧的清除，而细胞对活性氧的清除能力越强，则可避免植物体内过度积累的活性氧对细胞膜和细胞功能的伤害，因此细胞大量产生SOD说明抗性越敏感。两种枳壳种子随着胁迫时间的延长，SOD酶活性出现明显的上升趋势，随着胁迫浓度的提高，SOD酶活性呈现不同程度提高的趋势。在15 d检测结果显示不同浓度胁迫枳壳的SOD酶活性变化最大，且绿衣枳壳的SOD酶活性比旺苍大叶枳呈现显著性差异，具体见图1。种子在萌发过程中SOD酶活性也呈现增长趋势，可见SOD酶也随着种子萌发而产生变化。 　　3.2 POD酶活性的动态变化 　　由图2可知，随着胁迫时间的延长，POD酶活性呈现逐渐增加的趋势，且两个品种间差异不大。随着PEG胁迫的逐渐增强，种子内部产生了过氧化物酶POD，以清除PEG胁迫中出现的活性氧，从而提高了种子的抗胁迫能力，低浓度短时间的胁迫更有利于POD酶活性的提高。整体比较旺苍大叶枳产生的POD少于绿衣枳壳。 　　3.3 MDA含量的动态变化 　　植物脂质过氧化物的产物丙二醛（MDA