CD8T细胞在CA16感染手足口病中表达变化及潜在作用.docVIP

CD8T细胞在CA16感染手足口病中表达变化及潜在作用 　　【摘要】 目的：对比分析15～24个月及2～5岁CA16感染的普通型与危重症手足口病（hand， foot and mouth disease，HFMD）患者外周血中CD8+T细胞的表达情况，寻找发现与CA16致病有关的免疫病理因素。方法：收集2014年5-8月间昆明市儿童医院感染科确诊的儿童HFMD病例外周血标本共72例，其中普通型32例，危重症40例，采用流式细胞术对患者外周血CD8+T淋巴细胞亚群进行检测分析。结果：15～24个月普通型HFMD患者外周血CD8+T淋巴细胞百分比略高于正常健康儿童参考值，而危重症患者CD8+T细胞略低于正常参考值。此外，与正常参考值相比，2～5岁普通型及危重症患者外周血中CD8+T淋巴细胞百分比均减低，其中危重症患者略低于普通型患者。结论：CA16感染后，不同年龄、不同病情的HFMD患者外周血中CD8+T细胞的表达变化不太明显，说明CA16感染后，患者体内的CD8+T细胞基本能够发挥正常的抗病毒免疫效应。而在危重症时，两个年龄段患者CD8+T细胞百分比略低或减低，说明CA16的持续性感染可能对机体CD8+T细胞的表达产生了影响，使其杀伤病毒效应减低，这可能是CA16感染诱导神经系统并发症发生的免疫病理因素之一。 　　【关键词】 CA16； CD8+T细胞； 手足口病； 作用 　　病毒感染后机体内部的天然免疫系统虽然能够快速激活并诱导、招募适应性免疫应答的抗病毒免疫效应，但机体内感染病毒的复制传播能力仍在增加[1-3]。作为特异性杀伤病毒感染细胞的CD8+T细胞，能在病毒感染后快速激活并清除病毒，极大地抑制体内病毒的复制，但体内残存的病毒依然能够逃避机体的免疫自稳，造成体内中枢神经系统的慢性感染。这是由于CD8+T细胞在急性感染期快速清除病毒后，机体内病毒载量已经降低到机体无法识别的水平，此时中枢神经系统中的CD8+T细胞受刺激减少、数量减低，仅有少量存在于中枢神经系统中，而此时中枢神经系统中还可能残存少量未清除的病毒RNA。当机体内环境紊乱，患者疾病恶化时，中枢神经系统中存在的病毒很可能会再次发生复制，感染神经系统，导致中枢神经系统中少量CD8+T细胞无法全部快速识别并杀伤病毒感染细胞，最终促使患者出现严重的神经系统并发症，如无菌性脑膜炎、脑干脑炎等，甚至威胁生命[4-6]。 　　柯萨奇病毒是微小核糖核酸病毒家族中的成员之一，是感染人类的重要肠道病原体。虽然大多数感染呈现亚临床或轻度症状，但一些急性新生儿感染也常会导致患者病情恶化甚至死亡[7]。近年来暴发的儿童手足口病（Hand，foot and mouth disease，HFMD），柯萨奇病毒A16（Coxsackievirus 16，CA16）就是主要致病病原体之一，5岁以下儿童均极易感染。作为柯萨奇病毒成员之一，CA16感染人体后，患者表现的临床症状大多数较轻，能够自行消退，但少数重症病例也会发生病情恶化并致死的情况[8-13]。目前对于CA16急性感染期，中枢神经系统中的CD8+T细胞能否抑制残留病毒RNA的再次活化或是导致免疫病理反应的发生，或者还是同时参与保护机体及导致疾病还不明确。有研究显示患者感染CA16，体内的抗病毒抗体阳性率增高，提示体液免疫参与了抗CA16的过程，对于细胞免疫在抗CA16中的作用研究还相对较少[14-15]。由于CA16引发的重症病例多表现出严重的神经系统并发症，而CD8+T细胞又是中枢神经系统中起主要杀伤病毒感染细胞的免疫细胞，因此，本研究主要通过比对分析不同年龄段CA16感染的普通型、危重型HFMD患者外周血中CD8+T细胞的表达差异，寻找发现与疾病负担加重有关的免疫因素，进而为临床准确判断并分析疾病提供可参考的理论依据[16]。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 根据卫生部《手足口病诊疗指南》（2010年版）及《肠道病毒71型（EV71）感染重症病例临床救治专家共识》（2011年版）的诊断标准，选取2014年5-8月昆明市儿童医院感染科确诊的CA16感染的手足口病病例外周血标本共72例，其中普通病例共36例，15～24个月及2～5岁年龄段患者为16例及20例；危重症病例共36例，15～24个月及2～5岁年龄段患者为16例及20例[17-18]。 　　1.2 试剂及主要仪器 试剂：采用BD公司生产的检测淋巴细胞亚群的试剂盒BD Multitest 6-color TBNK Reagent。该试剂盒中包括识别富集不同淋巴亚群（T细胞、B细胞以及NK细胞）的抗体，其中包括识别NK细胞的抗体（CD16和CD56 PE）、识别T细胞的抗体（CD3 FITC）、为淋巴细胞群设置的CD45 PerCP-Cy?5.5、检测CD