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EAE发病机制中MALT1IL―17作用探讨 　　【摘要】 目的：通过建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型，观察小鼠脑组织中黏膜相关淋巴组织淋巴瘤转运蛋白1与血清白介素-17（Interleukin-17）的表达情况，并探讨两者在EAE发病机制中的作用。进一步探究MALTI是否可以作为多发性硬化（MS）的治疗靶点，以便寻找治疗MS的新手段。方法：将36只C57BL/6雌性小鼠按照随机数字表法分为EAE组和佐剂组各18只，EAE组采用MOG与完全弗氏佐剂的沫状混合物制备EAE模型，佐剂组仅给予弗氏佐剂。观察每只实验动物发病情况并每隔2 d进行一次神经功能评分。分别于免疫后14 d、24 d、40 d两组小鼠随机各取6只，心脏取血并4%多聚甲醛灌注取脑组织。取小鼠脑组织石蜡切片，免疫组化方法检测各组小鼠脑组织中MALT1并用ELISA法检测血清IL-17表达。结果：EAE组与佐剂组的小鼠神经功能评分、体重、血清中IL-17含量和脑组织中MALT1蛋白阳性细胞数比较差异均有统计学意义（P0.05）。EAE组中24 d组小鼠的神经功能评分（2.50±0.55）分明显高于14 d组的（0.83±0.41）分和40 d组的（1.50±0.32）分，体重（17.04±0.41）g明显少于14 d组的（18.33±0.49）g和40 d组的（18.15±0.13）g，且血清中IL-17含量（288.00±26.45）pg/mL明显高于14 d组的（122.60±10.11）pg/mL和40 d组的（184.40±29.51）pg/mL，脑组织中MALT1蛋白阳性细胞数（183.80±9.25）个明显多于14 d组的（78.25±9.47）个和40 d组的（133.50±19.87）个，差异均有统计学意义（P0.05）。结论：EAE小鼠神经功能评分越高，血清中IL-17含量越高，MALT1表达也越多，提示MALT1参与了EAE小鼠的发病过程，其机制可能与MALT1在EAE小鼠上调血清IL-17表达有关。 　　【关键词】 实验性自身免疫性脑脊髓炎； 多发性硬化； 黏膜相关淋巴组织淋巴瘤转运蛋白1； 白介素17 　　多发性硬化是一种中枢神经系统白质的炎性脱髓鞘疾病，实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）是人类中枢神经系统常见的脱髓鞘疾病即多发性硬化（multiple sclerosis，MS）的动物模型[1-2]。但其发病机制尚不清楚。在对EAE模型的研究中发现，自身反应性脑炎性Th1和Th17 CD4+T细胞通过免疫活化并入侵中枢神经系统，促进单核细胞与中性粒细胞等免疫效应细胞聚集并引起与人类多发性硬化（MS）临床症状、组织病理变化相类似的脱髓鞘等自身免疫性炎症[3-4]。IL-17是Th17细胞分泌的致炎性细胞因子，具有强烈的致炎作用，引起中枢神经系统脱髓鞘病变[5]。有学者认为，核转录因子（nuclear factor-κB，NF-κB）活化后进入细胞核调节炎症因子表达而引起脱髓鞘病变[6]。黏膜相关淋巴组织淋巴瘤转运蛋白1（Mucosa associated lymphoid tissue lymphoma transport protein 1，MALT1）被认为是NF-κB通路的激活物，利用敲除MALT1基因的小鼠诱导EAE，即使有淋巴细胞浸润，也无EAE的任何症状[7-8]。目前国内关于EAE的研究主要集于IL-17尚无MALT1在EAE发病机制中作用的相关报道，本实验旨在探讨MALT1及IL-17在EAE小鼠发病机制中作用的探讨。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验分组 将18～20 g，8～10周，C57BL/6雌性小鼠（北京维通利华实验动技术有限公司）36只按照随机数字表法分为EAE组和佐剂组各18只。两组小鼠一般资料比较差异无统计学意义（P0.05）具有可比性。 　　1.2 EAE模型制备 用0.01 mol/L的PBS将MOG35-55（武汉博士德公司）稀释。然后将稀释液与等量含结核分枝杆菌的完全弗氏佐剂（武汉博士德公司）混合，用玻璃注射器抽吸成油包水状，制成诱导EAE的抗原乳剂。EAE组小鼠背部中央偏头侧皮下点注射抗原乳剂。利用生理盐水代替MOG35-55稀释液参照上述方法制备乳剂，供对照组使用。各组于免疫后第0天、第2天分别进行腹腔注射百日咳毒素（美国Sigma公司）600 ng/只作为免疫增强剂。 　　1.3 数据采集 小鼠经MOG免疫后第8天开始，隔日采用盲法由两名观察者称量并记录每只小鼠的体重，采用国际通用的5分评分制对小鼠进行神经功能评分。评分标准：0分，无任何症状；1分，尾部张力消失，可见轻度步态笨拙；2