MIF在实验性大鼠重症急性胰腺炎中作用及意义.docVIP

MIF在实验性大鼠重症急性胰腺炎中作用及意义 　　【摘要】 目的：研究MIF在大鼠重症胰腺炎中胰腺的表达情况，从而探讨MIF在重症急性胰腺炎的发病机制。方法：胰腺被膜下注射牛磺胆酸钠造成重症急性胰腺炎模型然后关腹，并于相应时间点剖杀取胰腺组织及血清，而假手术组开腹后用手术刀柄轻刮胰腺三次，然后关腹，并于6小时后剖杀取胰腺组织及血清，测定血清淀粉酶和免疫组化法进行胰腺组织MIF的测定。结果：胰腺组织MIF的表达在胰腺炎模型组比假手术组明显增高，并随着模型组时间的延长，吸光度值明显升高，各组均有统计学差异。 结论：MIF在重症急性胰腺炎发生发展过程中发挥着极其重要的作用。 　　【关键词】 重症急性胰腺炎；巨噬细胞移动抑制因子；免疫组化 　　 　　重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis ,SAP)，它是一种全身性炎症反应性疾病，由于不同的致病因子引起胰腺腺泡的损伤，触发活性胰酶的释放、胰酶入血，导致单核巨噬细胞的激活，过度激活中性粒细胞，释放大量炎症介质，再通过炎症介质相互作用，引起“爆布样”效应，导致胰腺炎的发生。有人证实[ ]巨噬细胞移动移动因子（MIF），是一种重要的炎症介质，它能抑制巨噬细胞的游走，并能介导炎性细胞因子相互作用，最终导致胰腺炎的发生。但目前MIF在重症急性胰腺炎发生发展过程中的作用机制尚未完全明了。本实验通过免疫组化法检测MIF在实验性大鼠重症急性胰腺炎模型胰腺组织中的表达来探讨MIF在重症急性胰腺炎在疾病发生发展过程中所起的作用。 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　健康雄SPF级wista大鼠40只，140±20g（自甘肃中医学院动物实验中心提供），免抗大鼠MIF抗体，DAB显色剂，生物素过氧化物酶（北京博奥森生物技术公司），牛磺胆酸钠（美国Sigma公司），戊巴比妥钠（青海大学医学院提供），电子天平，离心机，恒温干燥机，全自动组织包埋机，电热恒温水浴箱，轮转切片机，显微成像系统（德国LEICA公司）。 　　1.2方法 　　1.2.1模型制作：将wista大鼠随机分成假手术组、胰腺炎模型6h、12h和24h四组，每组10只。假手术组于禁食不禁水6小时后开腹后用手术刀柄轻刮胰腺三次，然后关腹。胰腺炎模型组于禁食不禁水6小时后开腹后予以5%牛磺胆酸钠1ml/kg多点注册到胰腺背膜上然后关腹。 　　1.2.2标本采集及观察指标：假手术组、胰腺炎模型6h组、12h组以及24h组分别于6h、6h、12h及24h进行腹主动脉采血后送青海省人民医院检验科行胰腺淀粉酶测定，放血死亡后分离胰腺并将胰腺组织分成两份放入10%中性甲醛中固定脱水24h后进行石蜡包埋并切片，常规切片后一份进行HE染色进行病理观察，一份免疫组化染色制片后进行MIF表达的测定。 　　1.3统计学处理 :采用SPSS 18.0统计软件，对血清淀粉酶及MIF光密度值用x±SD表示，各组间使用单因素方差分析统计。Ρ 0.05认为有统计学差异。 　　2结果 　　2.1标本观察 　　2.1.1肉眼腹腔内脏脏器情况：假分术组肉眼见极少量腹水，随着造模时间延长，腹水量增多，甚至可出现血性腹水。假手术组肉眼见正常胰腺，6h组可见部分皂化斑，随着造模时间的延长，皂化斑越来越明显。 　　2.1.2胰腺病理学变化：大鼠胰腺病理评分是根据改良Grewal[ ]评分，表1所示，假手术组病理评分与胰腺炎6h组、12h组、24h组有统计学差异，Ρ 0.05，并随着造模时间的延长，病理评分越高。而且各组之间有统计学意义，Ρ 0.05。 　　2.2血清淀粉酶浓度 　　大鼠各组血清淀粉酶见表1，假手术组与与胰腺炎6h组、12h组、24h组有统计学意义，Ρ 0.05。且各组之间有统计学意义，Ρ 0.05。随便造模时间的延长，血清淀粉酶的值越高。 　　2.3胰腺组织MIF表达情况 　　应用免疫组化法测定各组大鼠胰腺组织中MIF的光密度，来判断各组大鼠在胰腺组织中MIF的表达情况，表1中显示，，假手术组与与胰腺炎6h组、12h组、24h组的平均光密度有统计学意义，Ρ 0.05。且各组之间有统计学意义，Ρ 0.05。随便造模时间的延长，平均光密度值越高。 　　2.4相关性分析 　　采用相关性分析发现大鼠胰腺损伤的程度与胰腺组织MIF的表达呈正相关关系，相关系数为0.906(Ρ 0.05)。 　　3讨论 　　重症急性胰腺炎是常见的外科急症之一，此病死亡率高，可高达50%以上[3],国内外很多学者认为重症急性胰腺炎实质上就是全身炎症反应综合征，重症急性胰腺炎时胰酶的释放和单核巨噬系统的激活，使得大量炎性细胞因子的释放，细胞因子间相互网络，产生“瀑布样”效应，从而导导致重症胰腺炎的发生。而巨噬细胞移动抑制因子，具有抑抑制巨