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CD34VEGF在非小细胞肺癌中表达及意义 　　【摘要】 目的 探讨CD34及血管内皮生长因子（VEGF）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达、关系及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法检32例肺癌组织和25例癌旁组织中VEGF表达及MVD值， 观察二者数值变化与组织学类型、分化程度和淋巴结有无转移的关系。结果 与瘤旁组织比较， 瘤组织中MVD值及VEGF表达阳性率高（P0.05）。结论 NSCLC组织中CD34和VEGF常常为高表达，二者具有正相关性， 与肿瘤的TNM分期及有无淋巴结转移有关。 　　【关键词】 CD34；血管内皮生长因子；非小细胞肺癌；表达 　　肺癌是目前常见恶性肿瘤之一， 其病死率居恶性肿瘤首位[1]， 其分为非小细胞肺癌及小细胞肺癌， 其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）大约占肺癌类型的80%。诸多研究已经证实血管新生是促进肿瘤生长的关键所在， 新生的血管不仅可以提供瘤体丰富的血液供应， 而且为肿瘤的血行转移提供了良好的条件[2]。而且新生的血管基底膜呈节段性分布， 对肿瘤细胞具有高度亲和性。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）及CD34是调节肿瘤血管形成的关键因子及血管标记物[3-5]， 但二者的关系目前还不明确。本研究应用免疫组织化学法检测NSCLC肿癌组织的VEGF、CD34的表达， 探讨二者的关系及其临床意义。现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1. 1 一般资料 收集南阳市第一人民医院2011年1月～ 2012年6月行手术切除的非小细胞肺癌患者32例， 其中男18例， 女14例， 年龄32～78岁， 平均年龄（58.7±6.9）岁， 所有患者术前均未接受放、化疗及生物免疫治疗。肺癌的组织学分类为：鳞癌11例， 腺癌15例， 细支气管肺泡癌6例。分化程度为：高分化8例， 中分化10例， 低分化14例。有淋巴结转移19例， 无淋巴结转移13例。TNM分期：Ⅰ期7例， Ⅱ期13例， Ⅲ～Ⅳ期12例。选择同期25例癌旁组织（距癌组织5 cm以上）作为对照。所有标本均用10%中性甲醛溶液固定， 石蜡包埋， 切片厚3 μm。 　　1. 2 主要试剂 兔抗人VEGF及山羊抗兔Ig-HRP均由美国SANTA CRUZ公司生产， 单克隆抗体即用型CD34与即用型DAB显色液由北京中山公司生产； CDEF试剂盒为8ESO公司产品。 　　1. 3 方法 　　1. 3. 1 免疫组织化学法检测VEGF 　　1. 3. 1. 1 按照免疫组织化学操作步骤依次进行脱蜡、抗原修复（高压修复）、加一抗（湿盒37℃放置1 h或4℃放置24 h）， 加二抗（湿盒37℃放置1 h）、DAB显色、显微镜观察计数、拍片分析。 　　1. 3. 1. 2 结果判定 胞浆染成棕黄或棕褐色为阳性细胞， 阴性细胞不染色。阳性细胞表达结果判断参照 Senger方法[6]， 着色细胞数70%为（+++）。 　　1. 3. 2 CD34免疫组化染色 　　1. 3. 2. 1 参照文献介绍的方法， 采用6 M抗原修复CDEF免疫组织化学染色方法， 进行CD34标记。对照染色：每次用已知CD34阳性标本切片作为阳性对照， 用PBS代替一抗或生物素标记的桥抗 （二抗） 作为阴性对照。 　　1. 3. 2. 2 结果判定、微血管计数 微血管计数方法（MVD计数法）参照Weidner校正方法。在低倍镜下（×100）寻找组织内微血管最多的区域染色， 即所谓的“热点”， 之后换用高倍镜（×400）， 在高倍镜下计数小静脉和毛细血管的数目， 排除肿瘤附近的的正常肺实质内的微血管以及有平滑肌壁及管腔直径8个红细胞直径的血管。所有标本由经验丰富的病理科医生阅读3次取平均值。 　　1. 4 统计学方法 应用SPSS19.0统计分析软件进行处理。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　与瘤旁组织比较， 瘤组织中微血管数目明显增多， VEGF表达阳性率明显提高（t值、χ2值分别为6.791， 16.116， P0.05）。见表1。 　　3 讨论 　　肿瘤患者的早期诊断和治疗是提高5年生存率的关键措施，如何实现对肺癌早期诊断并准确估计其转移能力一直是临床研究的热点问题。 　　研究证实恶性肿瘤的生长、局部浸润及转移等与新生血管关系密切。新生血管是指在某些因素的刺激作用下，由内皮细胞分化而成的一些新生血管，其对于实体肿瘤的生长、发展非常重要，是影响肿瘤生物学行为和转移复发的重要因素[2， 3]。新生的肿瘤血管不仅是癌细胞增殖的